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聚酮化合物β-酮酰-ACP合酶的计算机对比分析与组合生物合成: 2010年; 为了合理地设计新的聚酮化合物提高组合生物合成的效率,本文使用ClustalW、Mega4.0分析了26种来自不同聚酮合酶的β-酮酰-ACP合酶结构域的序列特征,并用ProtParam、Phdsec、Swiss-Model等工具对其中9种具有不同底物专一性的β-酮酰-ACP合酶的一级结构、二级结构和三级结构及活性位点进行了分析与预测。发现它们结构上的相似性大于序列上的相似性;活性位点都富含丝氨酸;底物含有2个羧酸基团的β-酮酰-ACP合酶的理论pI均小于5.0且其形式电荷总量也偏低;序列V303ELHGTGTPLGDPIEAGA320是这26种β-酮酰-ACP合酶的一段保守序列,但它并不与活性位点相邻。这些研究对进行聚酮合酶的模块或结构域替换以及定点突变具有重要的指导意义,也为探讨其的进化机制提供了参考。; 唐滢夏立秋王海龙胡胜标余子全孙运军; 关键词：组合生物合成底物专一性

喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响被引量：1: 2009年; 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护.; 袁灿夏立秋丁学知田野尹佳; 关键词：苏云金芽胞杆菌棉铃虫 CRY1AC 类胰蛋白酶

通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究被引量：5: 2019年; 多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多孢菌工程菌株,然后将其与刺糖多孢菌做原生质体融合,经加有抗生素平板培养基及发酵液HPLC分析筛选,得到了产多杀菌素的4株融合菌株。基于4株融合菌株多杀菌素产量都不及起始菌株高,接着采用不加抗生素直接筛选的方法,成功筛选到若干高产多杀菌素的融合菌株,其中菌株B-2多杀菌素产量提高最为明显,较原始菌株增加了331%,并用质谱分析做了进一步的验证。融合菌株B-2后续传代培养多杀菌素产量稳定,表明遗传稳定性较好。本文对红色糖多孢菌和刺糖多孢菌原生质体融合进行了探究并且成功提高了多杀菌素的产量,这为具有优良发酵特性的红色糖多孢菌和刺糖多孢菌融合菌株的构建提供了重要基础。; 易卓夏立秋丁学知胡胜标罗玉双王海龙唐滢黄鑫; 关键词：多杀菌素生物农药原生质体融合质谱分析

无机盐对多杀菌素发酵产量影响被引量：6: 2016年; 目的基于几种无机盐组分的添加,利用均匀设计重新优化多杀菌素复合培养基配方和溶磷控制提高多杀菌素发酵产量。方法通过单因素实验筛选对多杀菌素发酵产量有促进作用的几种无机盐组分,综合考虑无机盐组分和其它成分的影响,采用均匀设计方法重新优化多杀菌素发酵培养基配方。添加除磷剂控制溶磷进一步提高多杀菌素产量。结果培养基优化后多杀菌素发酵产量是初始配方条件的2.07倍,实现增产的目地。溶磷控制可以促进多杀菌素合成。结论均匀设计方法是一种有效的复合培养基再优化途径,经优化后多杀菌素发酵产量得到进一步提高。; 张由恒刘红雪陈宏张峰唐建立夏立秋; 关键词：多杀菌素无机盐

大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建及其应用被引量：2: 2010年; 【目的】构建能定点整合到链霉菌（Streptomyces）染色体上的高效表达载体。【方法】以链霉菌自杀型表达载体pLSB2为基础,通过插入链霉菌噬菌体ΦC31整合酶基因int和attP位点（Phage attachment site）,构建了能在大肠杆菌和链霉菌之间进行接合转移并定点整合到链霉菌染色体上的表达载体pMF。将pMF转化大肠杆菌ET12567（pUZ8002）,并分别接合转移天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolorM145）、变铅青链霉菌（Streptomyces lividansTK24）和红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea2338）,挑取接合子进行PCR和Southern杂交检测。将来自刺糖多孢菌S08-4的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（SAM-s）克隆到载体pMF的启动子下游,接合转移到天蓝色链霉菌中。【结果】表明pMF成功整入链霉菌染色体,并且检测到目的蛋白的表达。【结论】构建的pMF载体可作为外源基因定点整合表达的有效工具,为后续的基因功能研究以及链霉菌的遗传改造奠定了基础。; 全梅芳余凯夏立秋丁学知曾凡军寇笑笑王海龙胡胜标余子全李敬业; 关键词：链霉菌整合酶

利用钙离子通道阻断剂基因构建高效广谱杀虫工程菌: 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)能产生具有由特异杀虫蛋白组成的伴胞晶体,该种环境友好杀虫剂占据了生物杀虫剂90%的市场。但Bt在应用中存在杀虫毒力较化学杀虫剂弱、杀虫谱较窄和易导致...; 李文萍张祥丽夏立秋丁学知孙运军胡胜标罗玉双吕媛黄璠唐滢; 关键词：钙离子基因构建

一个新型嗜热菌质粒的测序鉴定及抗生素抗性研究被引量：2: 2010年; 一株分离自80℃温泉的嗜热菌对卡那霉素表现出抗性,推测这株菌可能携带有卡那霉素抗性的质粒.质粒消除后的抗性试验和质粒转化到大肠杆菌JM109中的抗性试验都表明该质粒具有卡那霉素抗性.将该质粒部分序列克隆测序后与Thermus属2个质粒的同源性最高达到89%,这进一步证实了这株嗜热菌里确实有嗜热质粒存在.; 王慧荣韦宇拓黄日波; 关键词：嗜热菌质粒抗生素抗性

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国家自然科学基金(30870064)