北京市自然科学基金(6092004)
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
- 相关作者：吴国娟张中文李华伟陆彦庄英华更多>>
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- 鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
- 2010年
- 应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
- 牛金鹏王惠川吴国娟
- 关键词：克隆融合蛋白原核表达
- 连翘酯苷对人工感染传染性支气管炎病毒雏鸡肺组织JAK/STAT信号通路的调节作用被引量：8
- 2011年
- 探讨连翘酯苷对人工感染传染性支气管炎病毒雏鸡的肺组织JAK/STAT信号通路的调节作用,分别设连翘酯苷预防组高、中、低和治疗组高、中、低6个剂量组,并设利巴韦林阳性对照组、空白对照组和病毒对照组。提取雏鸡肺组织总RNA,用相对荧光定量RT-PCR的方法测定雏鸡体内干扰素-α,JAK,STAT-1mRNA的相对表达量。结果表明连翘酯苷预防组高剂量100 mg/kg、中剂量50 mg/kg和治疗组中剂量100 mg/kg对雏鸡体内干扰素-α的mRNA水平表达有诱生作用(P<0.01),治疗组中剂量显著上调JAK及STAT-1的表达,与JAK/STAT信号通路一些因子的上调相关,其机制部分与肺组织的JAK/STAT信号通路激活和相关信号的表达有关,这是连翘酯苷发生抗病毒作用的机制之一。
- 张羽璐李华伟庄英华高飞苑嗣纯王惠川吴国娟
- 关键词：连翘酯苷鸡传染性支气管炎病毒干扰素-ΑJAK/STAT信号通路
- 鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 干扰素（IFN）是机体免疫细胞在诱导剂激发下产生的一种细胞因子。自身IFN对感染性疾病尤其是病毒性疾病具有良好的治疗作用,甚至非自身IFN在治疗感染性疾病过程中也能发挥重要作用。研究表明,IFN-β和IFN-γ受体缺损的小鼠对病毒的感染特别敏感。
- 牛金鹏庄英华许承洋王惠川吴国娟
- 关键词：干扰素Α多克隆抗体IFN-Γ病毒性疾病
- 连翘酯苷对体外培养细胞的毒性研究被引量：1
- 2009年
- 探讨了连翘酯苷对体外培养细胞的毒性,以期为人们更好地研究利用连翘酯苷提供实验依据。实验采用细胞病变法观察连翘酯苷对猪肾细胞(PK-15)、猴肾细胞(Marc-145)、鸡胚肾细胞(CEK)、鸡外周血淋巴细胞(PBL)等4种细胞的形态损伤;用MTT法检测连翘酯苷作用这4种细胞后的细胞活性和细胞数量的变化。根据这两种方法的结果计算出连翘酯苷对这4种细胞的半数致死量。实验结果显示高剂量的连翘酯苷可致细胞发生病变,而低剂量组的细胞形态优于对照组。经SPSS16.0统计,连翘酯苷对PK-15、Marc-145、CEK3种细胞的半数致死量分别为137.8、87.1、384.4μg/mL,对PBL应用到中华人民共和国兽药典(2000年版)规定药量的10倍剂量,结果未发现致死性。因此,适当合理的连翘酯苷用量对体外培养的细胞没有毒性,反而有一定的维持细胞形态的营养作用和刺激细胞增殖的作用。
- 武聚富张中文况玲沈红陆彦吴国娟
- 关键词：连翘酯苷细胞培养毒性
- 连翘酯苷在体外对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响(英文)被引量：1
- 2012年
- [目的]探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。[方法]将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg/ml),采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。[结果]与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量(P<0.05);而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。[结论]连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney cells,CEKs)上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。
- 李华伟张中文陆彦马元元张禹吴国娟
- 关键词：CHICKEMBRYOJAK-STAT
- PRRSV和PCV-2共感染小鼠疾病模型的建立被引量：1
- 2010年
- 45只6周龄昆明小鼠,随机分为3组:单次攻毒组(A组)、连续攻毒组(B组)和正常对照组(C组)各15只。A组于试验1 d先后接种PRRSV和PCV-2,B组于1,3,5 d接种PRRSV和PCV-2,C组于1 d接种MEM细胞培养液,各组于试验后7,14,21,28,35 d随机选3只采血后处死,采用体质量测定、抗体ELISA、荧光定量PCR、肉眼和显微病理观察等4项检测指标进行模型鉴定。结果显示,与C组相比,A组和B组小鼠体质量增率减慢;肺脏出现典型的间质性肺炎病变;腹股沟淋巴结肿大,淋巴细胞坏死;脾脏淋巴细胞缺失,被膜散在出血;肝静脉淤血;抗体检测均呈阳性;荧光定量PCR检测证实,C组不存在病毒复制,A、B组小鼠被检组织均存在病毒复制,相对病毒含量在淋巴结中较其他组织差异显著(P<0.01)。结果表明,试验已成功建立PRRSV和PCV-2共感染昆明小鼠疾病模型。
- 马元元张中文周旭平裴兆柱刘钧许承扬吴国娟
- 关键词：小鼠PRRSV共感染
- 鸡传染性支气管炎病毒M41型的扩繁及在鸡胚肾细胞上的适应性研究被引量：4
- 2011年
- 探明鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virus,IBV)感染鸡胚肾细胞(Chicken Embry-o Kidney Cells,CEK cell),并且实现其增殖为目的。将IBV稀释液注射到SPF鸡胚尿囊腔内,培养鸡胚扩繁,观察记录结果;并培养CEK细胞,采用100倍半数组织培养感染量的IBV进行染毒实验;应用Reed-Muench法计算半数鸡胚感染量为10-6.68/0.1 mL;用Real time PCR检测IBV在感染细胞中的含量,以确定IBV在CEKcells中已经感染且增殖成功。结果表明,接种10日龄的SPF鸡胚可以收集更多的、约8 mL的尿囊液毒;反复盲传至7代的IBV可使CEK cells产生明显的细胞病变效应;通过实时荧光定量PCR和RT-PCR检测,最终确定IBV-M41型扩繁成功并且能够在CEK细胞上繁殖,为下一步实验提供了参考。
- 李华伟武聚富庄英华高飞吴国娟
- 关键词：传染性支气管炎病毒PCR适应性
- 连翘酯苷对鸡IFN-α和JAK-STAT信号通路相关因子的影响被引量：4
- 2011年
- 【目的】探讨连翘酯苷作用于鸡胚肾(CEK)细胞后,IFN-α的表达变化及JAK-STAT通路相关因子mRNA的表达变化,及连翘酯苷对IFN-α和JAK-STAT信号通路的影响。【方法】将连翘酯苷设为3个浓度(100、200和400μg.mL-1),采用荧光定量RT-PCR,检测IFN-α和JAK-STAT通路相关因子的mRNA表达变化;用western blotting检测IFN-α的蛋白表达情况。【结果】与正常组相比,连翘酯苷不仅显著提高了IFN-α的表达量(P<0.05);而且明显上调了STAT1、JAK1、IFNAR1、IFNAR2、IRF1、IRF7的表达。【结论】连翘酯苷能够在鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney cells,CEKs)上诱导IFN-α的表达,且能够正向调节JAK-STAT信号通路传导。
- 李华伟张羽璐张中文夏楠郭玮吴国娟
- 关键词：连翘酯苷IFN-ΑJAK-STATWESTERNBLOTTING
- 血浆中连翘酯苷高效液相色谱检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 为建立测定血浆中连翘酯苷含量的高效液相色谱方法,将血浆样品经去蛋白处理,以乙腈-水-醋酸（18∶82∶0.41）为流动相,流速为1 mL/min,检测波长为332 nm,柱温为25℃,进样量为10μL,经Angilent ZORBAX SB-C18（5μm×4.6mm×250 mm）色谱柱分离,进行色谱分析。结果表明,本方法连翘酯苷的血浆浓度在0.05-200μg/mL内线性关系良好,精密度和重复性试验RSD均小于5%。本方法简便、灵敏、重现性高,可用于连翘酯苷的药动学和相对生物利用度的研究。
- 周旭平陆彦张中文沈红吴国娟
- 关键词：连翘酯苷高效液相色谱血浆
- 鸡传染性支气管炎病毒荧光定量PCR标准曲线的建立被引量：6
- 2009年
- 笔者针对传染性支气管炎病毒(IBV)M41株中编码核衣壳蛋白的N基因设计并合成一对引物,通过构建重组阳性标准质粒的方法,成功建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测IBV的标准曲线。该方法所建立的曲线可检测到初始模板中5×102copies/μL的病毒核酸,与常规PCR相比敏感性大大提高。笔者建立的荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于传染性支气管炎的临床诊断和健康带毒鸡群的检测。
- 武聚富张中文毛东有沈红陆彦况玲吴国娟
- 关键词：传染性支气管炎病毒荧光定量PCR病毒检测
