辽宁省教育厅科学基金(L2013335)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：郑德宇周静赵宏姚素艳刘建生更多>>
- 相关机构：辽宁医学院抚顺市中心医院更多>>
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- 绿原酸对Aβ_(25-35)诱导的大脑皮层细胞损伤的保护作用机制被引量：3
- 2014年
- 目的：研究绿原酸（CHA）对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）激活巨噬细胞导致大脑皮层细胞损伤的保护作用机制。方法采用生后0~3 d左右的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取出大脑皮层细胞然后做体外培养。培养8 d后与小鼠腹腔巨噬细胞共同培养2 d，再加入10μmol/L Aβ25-35制作阿尔茨海默病细胞模型。实验分为单独培养组、共同培养组、单独培养Aβ组、共同培养Aβ组和共同培养CHA组分别作用0.5、1、2、4、6 h后检测各组的结果。细胞损伤程度通过观察细胞形态和记数判定。p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）、有丝裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2（MAPKAPK-2）和热休克转录因子（HSP27）三种蛋白磷酸化的表达水平由Western blot检测。通过免疫荧光观察微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达。结果 CHA显著抑制Aβ25-35处理所致的颗粒细胞密度的减少并且改善细胞的形态。Aβ25-35可以使p38MAPK的磷酸水平明显增加，在2h的时候磷酸化水平达到最高峰，4h后就逐渐下降，而使MAPKAPK-2和HSP27的磷酸化水平降低，2h降低最明显。结论 CHA通过抑制Aβ25-35诱导巨噬细胞释放炎症因子激活的p38MAPK信号转导通路，从而可以起到保护神经细胞的作用。
- 周静赵宏秦书俭姚素艳郑德宇
- 关键词：绿原酸大脑皮层细胞热休克蛋白27
- HLA-A2小干扰RNA的设计及沉默效果检测被引量：1
- 2014年
- 背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人的主要组织相容性复合物,在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达,可以延长移植物的存活时间。目的:设计HLA-A2小干扰RNA,检测其对HLA-A2表达沉默的作用。方法:设计4种HLA-A2 siRNA靶点序列构建其慢病毒表达体系,体外感染HLA-A过表达的293T细胞,观察4种靶点的敲减效率并筛选出有效靶点序列。体外培养人胚肺成纤维细胞,并用携带目的干扰序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Western blot检测在人胚肺成纤维细胞中对HLA-A2表达沉默的作用。结果与结论:根据Genbank中HLA-A2的mRNA序列,设计合成了3个小干扰RNA,在体外能有效的沉默HLA-A2在293细胞中的表达,将基因序列亚克隆入干扰载体后感染人胚肺成纤维细胞,也能有效的沉默HLA-A2的表达,效率达80%左右。
- 刘建生赵刚裴丹郑德宇
- 关键词：HLA抗原基因沉默成纤维细胞人胚肺成纤维细胞
- SIS重塑为海绵状后对BMSCs诱导的软骨细胞增殖分化的影响
- 2015年
- 目的观察大鼠骨髓干细胞(BMSCs)诱导分化的软骨细胞,在具有三维孔隙结构的海绵状猪小肠粘膜下层(SIS)表面的生长情况,探讨SIS由薄膜状重塑为海绵状后对软骨样细胞增殖分化的作用,为软骨组织工程提供新型的天然生物衍生材料。方法原代培养SD大鼠BMSCs,流式术检测细胞表面抗原表达;诱导BMSCs分化为软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定。按Abraham法将猪近段空肠制备成脱细胞的SIS,再将薄膜状的SIS经液氮低温研磨制成微粒,交联后采用冷冻干燥技术重塑形为具有三维孔隙结构的海绵状SIS。将软骨细胞与海绵状SIS共培养:扫描电镜观察细胞生长状态;Western blotting检测共培养组织ColⅡ的表达;DMMB法测量葡萄糖胺聚糖(GAG)表达量。应用材料浸提液培养软骨细胞,相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖。结果原代培养的BMSCs表达干细胞相关抗原,并可分化为软骨细胞,甲苯胺蓝将糖胺多糖染成蓝色。脱细胞的SIS未见有核物质,海绵状的SIS具有大量较均匀的三维孔隙。软骨细胞能在材料孔隙内良好生长,软骨分化指标ColⅡ与GAG表达量明显增加;浸提液培养的软骨细胞增殖能力强。结论重塑形后具有三维孔隙结构的海绵状SIS促进BMSCs来源的软骨细胞增殖和分化,为软骨组织工程提供了新型的天然生物衍生材料。
- 吴波郑德宇
- 关键词：骨髓干细胞软骨细胞增殖分化
- 绿原酸对Aβ_(25-35)诱导小脑颗粒细胞损伤的保护作用机制被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨绿原酸(chlorogenic acid,CHA)对β淀粉样蛋白25-35(amyloidβ-protein 25-35,Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起的小脑颗粒细胞(cerebellar granular cell,CGC)损伤的保护作用机制。方法:实验分为空白对照组、Aβ25-35处理组和Aβ25-35+CHA共同处理不同时间组;空白对照组:加入等量培养基;Aβ25-35损伤组:加入10μmol·L-1 Aβ25-35;Aβ25-35和CHA处理不同时间组:将10μmol·L-1 Aβ25-35和1 000μmol·L-1 CHA同时加入共同培养2 d的小脑颗粒细胞和巨噬细胞,分别作用6,12,24,48,96 h。应用倒置相差显微镜观察小脑颗粒细胞的形态变化并计数;应用Western blot检测p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)、下游底物有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(mitogen-activated protein kinase activating protein kinase-2,MAPKAPK-2)、热休克转录因子(heat-shock protein27,HSP27)三种蛋白的磷酸化表达的改变。结果:CHA保护组的小脑颗粒细胞数量较Aβ25-35损伤组明显增加;CHA作用96 h可明显抑制Aβ25-35引起的巨噬细胞磷酸化的p38MAPK表达增加,逆转Aβ25-35引起的联合培养的小脑颗粒细胞和巨噬细胞磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论:绿原酸是通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的蛋白表达起到保护小脑颗粒细胞的作用。
- 周静赵宏刘建生姚素艳郑德宇
- 关键词：绿原酸小脑颗粒细胞热休克蛋白27HSP27
