国家自然科学基金(30428010)
- 作品数：5 被引量：43H指数：2
- 相关作者：张愚关云谦任萍王淑艳徐艳玲更多>>
- 相关机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人胚皮层神经干细胞培养方法的探讨(简报)被引量：7
- 2007年
- 神经干细胞是一类具有多向分化潜能、自我复制能力，在特定条件诱因下：能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化的未分化或低分化细胞。神经干细胞的研究对于我们阐明神经发生机制，进行神经变性疾病的细胞替代治疗都有重要意义。目前．从人胚组织分离神经干细胞的方法不尽相同，对于大脑皮层神经干细胞的分离．一些学者认为机械分离即能达到分离细胞的效果，采用消化酶可能会引起细胞存活率的下降且对于分离大量细胞并无明显效果：另外一部分文献报道则主张通过一种或多种酶消化结合机械吹打达到分离细胞进行原代培养的目的。由于人胚组织来源有限，而且人胚神经细胞特别是皮层神经细胞对缺血、缺氧和损伤非常敏感，如何在完全分离细胞的同时减少细胞死亡率成为影响实验成败的关键问题：本实验进一步对两种常用基础培养基对神经干细胞成球的作用进行了比较，并采用两种消化酶进行传代。探索高效规范的人胚皮层神经干细胞培养方法．为进一步利用神经干细胞进行基因治疗和细胞移植奠定基础。
- 任萍关云谦张愚
- 关键词：干细胞皮层
- OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究被引量：1
- 2007年
- OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。实验构建表达OTX1基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内,构建表达OTX1以及GFP-OTX1基因的慢病毒载体;将pDUET-OTX1、pDUET-GFP-OTX1及pDUET101(空载体对照)质粒分别与慢病毒包装质粒pCMVΔR8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OTX1基因、GFP-OTX1基因的重组慢病毒DUET-OTX1、DUET-GFP-OTX1以及仅携带GFP基因的DUET-GFP;用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞,证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞,且转导的OTX1或GFP-OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达;培养OTX1单克隆抗体细胞,浓缩抗体上清,通过Westernblot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP-OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。证实了慢病毒载体是高效的基因转移载体;OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子,经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。
- 任萍王淑艳关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：慢病毒基因表达
- 食蟹猴脑室下区成体神经前体细胞培养及鉴定
- 2006年
- 目的分离、培养成年食蟹猴脑室下区神经前体细胞并研究其生物学特性。方法取成年食蟹猴脑室下区组织,经木瓜蛋白酶和脱氧核糖核酸酶消化后,接种于DMEM-F12无血清培养基中。结果神经前体细胞可以增殖形成神经球,经免疫细胞化学方法检验这些细胞呈现巢蛋白nestin阳性,神经球分化后的细胞表达胶质细胞的标记物及神经元的标记物。脑室下区来源的神经球进行自主分化时可分化成神经元和胶质细胞,但分化成神经元的比例都很少。结论从食蟹猴脑室下区分离培养的细胞可以在体外增殖形成神经球,并可分化为神经元和胶质细胞,符合神经前体细胞的生物学性状。
- 吴迪岳峰关云谦张愚
- 关键词：脑室下区神经前体细胞食蟹猴神经球
- 慢病毒载体的设计及应用进展被引量：35
- 2006年
- 慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由于其结构和功能的特点作为一种重要的基因转移工具被应用于基因治疗和细胞分子生物学研究领域。目前,为进一步完善慢病毒载体的功能,研究者们从提高载体的生物安全性及增强外源基因的表达调控能力等方面对慢病毒载体进行了改建。对慢病毒载体的设计进展及应用进行了简要综述,并展望了今后的研究前景。
- 王淑艳张愚
- 关键词：慢病毒载体转录调控基因治疗
- 皮层神经发生的分子调控机制
- 2007年
- 在高等动物神经发育过程中,背侧端脑神经上皮细胞在多种调控基因及环境调控因子的作用下经历了错综复杂的发育事件,逐步形成具有精细的分层结构和高级功能的神经皮层。这些发育中的调控具有严格的时间和区域特性。本文主要就皮层形成中神经干细胞增殖、分化方向及皮层神经元亚型的特化等方面的调控机制予以论述。
- 任萍关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：皮层发育神经干细胞
