广东省医学科学技术研究基金(A2011363)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：娄海波张哲欢陈振瑞周烨李长征更多>>
- 相关机构：复旦大学上海医学院南方医科大学南方医院生物技术有限公司更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金更多>>
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- 哺乳动物细胞表面展示全长类风湿关节炎抗体库的构建被引量：4
- 2011年
- 目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建全长人源类风湿关节炎抗体库。方法分离类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体全长轻链基因和重链可变区基因,分别插入哺乳动物细胞表达载体pDGB-HC-TM,电击转化感受态大肠杆菌TOPO-10,分别构建抗体轻链基因库和抗体重链基因库,然后将抗体轻链、重链基因库联合转染293T细胞,用流式细胞仪分析全长人源抗体在293T细胞表面的表达。结果成功构建了类风湿关节炎患者来源的IgG1-Kappa型抗体基因库,随机挑选单克隆经DNA序列分析显示轻链库、重链库的序列正确率分别为80%和60%,可表达的抗体库多样性为6.13×1010。结论类风湿关节炎抗体基因库转染293T细胞后能够在细胞表面表达全长人源抗体,所展示的抗体库具有良好的多样性,能够为下一步筛选特异性抗体奠定基础。
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- 关键词：类风湿关节炎流式细胞仪
