广西壮族自治区自然科学基金(0991112)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：黎洪棉李德绘柳大烈梁自乾余元龙更多>>
- 相关机构：中山大学广西医科大学第一附属医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- BrdU标记胎兔骨髓间充质干细胞及对细胞生物学行为影响的体外研究被引量：2
- 2011年
- 目的:通过用5-溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记胎兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs),探讨BrdU作为干细胞标记示踪方法的可行性。方法:取胎兔骨髓组织密度梯度离心法分离培养BMSCs。取P3代细胞以终浓度分别为5,10,15,20mg/L的BrdU进行标记,分别记为A,B,C,D组;另1孔不含BrdU,作为空白对照(E组)。标记12,24,48,72h后,采用免疫组织化学检测各组细胞阳性率,苔盼蓝排染法细胞计数观察标记后细胞活性。结果:细胞培养观察:原代培养的细胞形态主要为宽大扁平短梭形细胞;传代后细胞形态为长梭形;第3代BMSCs经诱导均能向成骨细胞和脂肪细胞分化。免疫组织化学观察:第3代BMSCs经BrdU标记后,在荧光显微镜下胞核呈绿色荧光。孵育12h,A,B,C,D组细胞标记阳性率逐渐增高,分别为(33.2±4.3)%、(34.5±3.9)%、(47.9±4.8)%、(52.8±5.1)%,对照组细胞标记阳性率为0,C,D组与A组比较,差异有统计学意义(P<0.01);24h,A,B,C,D组标记率分别为(48.1±4.0)%、(83.4±5.3)%、(91.7±4.9)%、(92.6±4.2)%,对照组细胞标记阳性率为0。48h和72h,A,B,C,D,E组标记情况与24h相似。孵育24,48,72h,10,15,20mg/L组细胞阳性率与5mg/L组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞计数:孵育12h,各组细胞活性均在90%以上,A、B、C、D组与对照组(E)比较,差异无统计学意义(P>0.05);孵育24,48,72h,各组细胞活性情况与12h情况相似,A,B,C,D组与对照组(E)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。随着标记时间的延长和BrdU剂量的增加,标记率逐渐增高,BrdU终浓度为10mg/L以上,且标记48h后细胞标记率>90%,活细胞数>90%。结论:BrdU标记BMSCs的最佳时间为48h,最佳浓度为10mg/L;BrdU对细胞毒性小,标记率及安全性高。
- 李德绘黎洪棉梁自乾柳大烈
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞标记
- 大鼠脂肪干细胞定向分化为成骨细胞及体外增殖过程中地塞米松的抑制性干预被引量：3
- 2009年
- 背景:不同浓度的地塞米松在体外诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化过程中所起的作用是不同的,其作用机制尚不明确。目的:验证脂肪干细胞向成骨细胞分化的能力,观察成骨细胞分化早期不同浓度地塞米松对脂肪干细胞体外增殖的抑制效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/03在南方医科大学组织工程研究中心完成。材料:5周龄雄性SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供。地塞米松为Sigma公司产品。方法:切取大鼠腹股沟皮下脂肪组织,用酶消化法分离培养脂肪干细胞,传至第3代后,加入条件培养液(含胎牛血清、维生素C、β-甘油磷酸钠、青霉素、链霉素的DMEM高糖完全培养基)进行体外预培养。设立2组:地塞米松组分别于细胞传代后第0,2,4天向培养基中加入10-6mol/L地塞米松1mL,空白对照组仅加入等量条件培养液。主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长及成骨分化情况。采用MTT比色法检测细胞增殖情况。结果:①原代培养中贴壁细胞多数呈长梭形,少数呈小圆形或三角形,六七天后进行传代;传代后细胞生长速度较原代细胞明显增快,至第15代细胞仍未出现明显衰老现象;第3代细胞在加入地塞米松后逐渐呈均一的长梭形,随时间延长呈叠形多层排列,细胞外基质明显增多,并逐渐形成多个小结样结构。空白对照组细胞形态不一,部分细胞呈多边形或三角形,细胞外基质明显少于地塞米松组,罕见小结样结构。②在体外传代培养过程中,空白对照组脂肪干细胞能够保持持续分裂增殖的能力。与空白对照组比较,细胞传代培养后0,2d加入地塞米松,干预6,8,10,12d时细胞数量均明显下降(P<0.05);传代培养后4d加入地塞米松,干预6,8,10,12d时细胞数量无明显变化(P>0.05)。结论:传代的脂肪干细胞经地塞米松处理后,细胞形态趋于成熟,生长速度减慢,可定向分化为成骨�
- 黎洪棉高建华余元龙南华付冰川
- 关键词：脂肪干细胞成骨细胞地塞米松
- 人参皂苷Rb1对体外条件下大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化的影响被引量：5
- 2011年
- 本研究旨在观察人参皂苷Rb1在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖与成骨分化的影响。
- 李德绘黎洪棉梁自乾柳大烈单磊
- 关键词：骨髓间充质干细胞人参皂苷RB1干细胞增殖成骨分化
- 荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖及其成骨分化被引量：2
- 2009年
- 背景:目前关于骨髓基质干细胞的标记报道较多,各有其优缺点,寻找一种有效、简便的细胞标记与示踪的方法尤为关键。目的:观察经荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖与成骨分化情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/12在南方医科大学组织工程研究中心完成。材料:SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供。DiI应用液为美国Molecular ProbeInc公司产品。方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞,加入无血清的DMEM制成细胞悬液,再加入1×109L-1的DiI应用液5μL,37℃下孵育25min,清洗离心后,加入DMEM高糖完全培养基,荧光显微镜观察细胞荧光强度及形态变化。另取传至第3代细胞,加入含地塞米松、维生素C、β-磷酸甘钠、体积分数为10%胎牛血清的成骨诱导剂进行诱导分化。主要观察指标:DiI标记后细胞形态变化,XTT比色法测定细胞增殖状况,细胞上清液中乳酸脱氢酶活性,成骨诱导后细胞碱性磷酸酶活性及成骨分化能力。结果:锥虫蓝染色见骨髓基质干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下DiI标记后全部细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的骨髓基质干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,DiI标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光。与未标记细胞比较,DiI标记的骨髓基质干细胞增殖吸光度、培养上清液乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性均无明显变化(P>0.05)。成骨诱导7d后,钙钴法染色两组骨髓基质干细胞均见不同程度的胞质呈棕黑色改变。结论:DiI能有效标记体外培养的骨髓基质干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性作用;此外,DiI标记不影响骨髓基质干细胞的生长、增殖及成骨分化能力。
- 黎洪棉余元龙柳大烈吴涛赵培冉梁双武
- 关键词：骨髓基质干细胞DII增殖分化
- 兔脂肪间充质干细胞分离培养方法被引量：2
- 2015年
- 目的:建立一种简单高效的兔脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)分离培养方法,为兔模型中ADSCs研究提供简便充足的干细胞来源。方法:体外分离兔腹股沟皮下脂肪组织,采用0.1%I型胶原酶消化,用含10%胎牛血清的高糖完全培养基贴壁培养兔ADSCs,并对其细胞形态、体外增殖能力、多向分化潜能及表面标记进行分析。结果:体外分离培养的兔ADSCs具有良好的细胞形态、极强的增殖能力,体外经二向诱导,具有成脂及成骨分化潜能,兔第2代ADSCs表面标记CD34、CD105阳性,Sca-1高表达,几乎不表达CD45及SSEA-1。结论:利用兔腹股沟皮下脂肪组织,能培养出高纯度、具有良好干细胞特性及极强增殖能力的兔ADSCs,能很好地满足组织构建对种子细胞量大质优的需求。
- 余炳超李德绘黎洪棉
- 关键词：分化潜能
