“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09302-004)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王丽钱秀萍殷瑜杜郁陈代杰更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院药物研发中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一株来源于可可西里土壤样品的嗜碱耐盐细菌的鉴定
- 应用稀释涂布平板法,以添加1%碳酸钠的Bennete培养基为分离培养基,从采集自青海可可西里的一份沙土样品中分离到一株乳黄色嗜碱耐盐细菌CPCC100153。该菌革兰氏染色阳性,细胞椭球形,无运动性,在细胞近中央处有椭圆...
- 孙莹苏进进靳蓉张玉琴余利岩
- 文献传递
- 以Apo A-I为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立被引量：3
- 2011年
- 目的建立靶向人ApoA-I转录调控序列的高通量药物筛选模型,用于筛选ApoA-I基因表达上调剂。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增ApoA-I上游的启动子序列,克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL4.17上游,采用脂质体介导的方法将重组质粒转染人肝癌细胞HepG2,在G418抗性存在的条件下,通过有限稀释法筛选稳定转染细胞株。对溶剂浓度和药物作用时间进行条件优化,应用阳性化合物染料木素评价模型有效性,通过检测荧光素酶的表达活性变化来筛选人ApoA-I基因表达上调剂。结果通过PCR成功扩增了人ApoA-I基因上游的启动子序列,构建了相应的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4-ApoP,并建立稳定转染细胞株ApoP-LucHepG2。对筛选条件优化后,应用阳性化合物进行评价,筛选窗相关系数Z’因子为0.68,大于0.5,适于进行高通量筛选。应用该筛选模型对5000余种化合物进行筛选,4个黄酮类化合物和白藜芦醇显示出较好的活性,半数有效浓度均小于10μg/ml。结论成功建立了人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型,并利用该模型筛选到5个活性化合物。
- 杜郁王丽王丽非司书毅杨媛洪斌
- 关键词：载脂蛋白A-I转录启动子荧光素酶类
- 基于反义RNA技术的FabI抑制剂筛选模型的构建被引量：3
- 2012年
- 目的基于反义RNA沉默技术构建针对细菌FabI的超敏全细胞筛选模型，用于筛选FabI抑制剂。方法以Escherichia coli基因组DNA为模板，PCR扩增屈6，基因的-74～86bp核苷酸序列，反向插入携带pairedtermini结构的反义质粒pHN678中，得到重组质粒pHNF，再转化至E-coli中，得到反义工程菌E．coli／pHNF；通过平板表型观察对反义工程菌进行筛选；考察了IPTG浓度对筛选模型的影响，确定96孔板抗菌筛选模型的条件，并用三氯生作为阳性对照、氨苄西林和浅蓝菌素作为阴性对照对该模型进行评价。结果获得了针对廊6，的反义工程菌，确定了最适IPTG浓度为40μmol／L，成功构建了FabI特异性酶抑制剂的超敏全细胞筛选模型，并验证了其可行性。应用该筛选模型对5847个内生真菌次级代谢产物进行活性筛选，初筛阳性率约为9．7％，经复筛后获得8份阳性样品。结论成功建立了基于反义RNA沉默技术的FabI超敏全细胞筛选模型，并利用该模型筛选到8份阳性样品。
- 殷瑜戈梅钱秀萍陈代杰
- 关键词：反义药物评价临床前
