国家自然科学基金(30972718)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：陈旭勤李岩王浙东崔伟丽白艳辉更多>>
- 相关机构：苏州大学上海交通大学医学院附属第三人民医院更多>>
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- 慢病毒介导EGFL7沉默对肺癌A549细胞体外生物学行为的影响
- 2013年
- 目的:通过慢病毒介导沉默表皮生长因子样结构域7基因(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)在肺癌A549细胞的表达,探讨EGFL7对A549细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成的影响。方法:利用慢病毒介导靶向EGFL7的shRNA(LV-RNAi)转染A549细胞,实验分三组:LV-RNAi组(转染LV-RNAi),LV-NC组(转染空病毒)和对照组(A549细胞)。Real-time PCR和Western blotting分别检测LV-RNAi感染对A549细胞EGFL7 mRNA和蛋白水平表达的影响,MTT法和流式细胞术分别检测沉默EGFL7对A549细胞增殖和凋亡的影响,Transwell侵袭实验和鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)实验分别检测沉默EGFL7对A549细胞侵袭和血管生成能力的影响。结果:慢病毒稳定高效地转染A549细胞,LV-RNAi组细胞内EGFL7 mRNA[(0.18±0.03)vs(0.98±0.05)、(1.03±0.09),P<0.05]和蛋白表达较LVNC组和对照组显著降低。与LV-NC组及对照组相比,沉默EGFL7对LV-RNAi组A549细胞的增殖活力[感染120 h时:(0.73±0.22)vs(0.79±0.08)vs(0.81±0.11),P>0.05]与和凋亡率[感染120 h时:(1.92%±0.06)vs(2.11%±0.07)vs(1.85%±0.13),P>0.05]均无显著影响;同时,LV-RNAi组A549细胞侵袭入下室细胞数[(61.7±14.5)vs(272.8±21.5)、(286.6±40.0)/mm2,P<0.05]与血管生成指数[(31.7±4.1)vs(96.3±4.4)、(103.3±6.5),P<0.05]均显著减少。结论:沉默EGFL基因能够抑制A549细胞侵袭和血管生成能力,但不影响其增殖与凋亡。
- 沈笑春黄建安
- 关键词：EGFL7肺癌血管生成
- B7同源体3经Toll样受体2依赖性机制增强肺炎链球菌脑膜炎小鼠的炎性反应和病理损伤被引量：4
- 2012年
- 目的探讨B7同源体3(B7-H3)对肺炎链球菌(SP)脑膜炎大鼠的炎性反应和血脑屏障完整性的影响及其机制。方法经小鼠侧脑室穿刺注入SP悬液,制备脑膜炎模型。野生型鼠分5组,分别为PBS组、SP组、SP+B7-H3组、SP+同型单抗组、SP+B7-H3阻断性单抗组。Toll样受体2基因剔除(TLR2-KO)鼠分3组:PBS组、SP组、SP+B7-H3蛋白组。术后6 h、18 h、30 h,麻醉其下眼眶采血法收集血清,取脑组织,制备脑组织匀浆。ELISA检测其血清TNF-α、IL-6、IL-1β和单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)水平以及脑组织匀浆中血清蛋白(Albumin)和IgG水平。结果 1.ELISA检测野生型鼠血清SP组、SP+B7-H3组注射18 h后TNF-α、IL-6和MCP-1的表达及30 h后TNF-α、IL-6、IL-1β和MCP-1的表达均较PBS组显著升高(Pa<0.05);SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点各炎性因子的表达差异均无统计学意义(Pa>0.05);SP+B7-H3组注射18 h后MCP-1的表达及30 h后TNF-α和IL-6表达均显著高于SP组[(42.010±3.883)ng.L-1 vs(29.620±3.830)ng.L-1;(37.550±3.232)ng.L-1 vs(24.570±2.377)ng.L-1;(66.160±5.766)ng.L-1 vs(48.630±4.418)ng.L-1,Pa<0.05];SP+B7-H3阻断性单抗组注射30 h后,TNF-α和IL-6的表达均显著低于SP组[(18.680±1.798)ng.L-1 vs(24.570±2.377)ng.L-1;(37.180±3.150)ng.L-1 vs(48.630±4.418)ng.L-1,Pa<0.05]。2.ELISA检测脑组织匀浆:SP组、SP+B7-H3组注射18 h、30 h后Albumin、IgG的表达较PBS组均显著升高(Pa<0.05);SP+同型单抗组与SP组比较,各时间点Albumin、IgG的表达差异均无统计学意义(Pa>0.05);SP+B7-H3组注射18 h、30 h后脑组织匀浆Albumin的表达及30 h后脑组织匀浆IgG的表达均显著高于SP组[(59.090±4.184)μg.g-1vs(35.450±4.256)μg.g-1;(59.890±4.701)μg.g-1 vs(43.790±3.508)μg.g-1;(36.220±2.775)μg.g-1 vs(25.440±2.620)μg.g-1,Pa<0.05]。3.SP+B7-H3阻断性单抗组注射后18 h、30 h Albumin的表达及30 h IgG的表达显著低于SP组[(20.590±1.720)μg.g-1 vs(35.450±4.256)μg.g-1;(28.650±3.063)μg.g-1 vs(43.790±3.508)�
- 陈旭勤汪江淮张学光包关水
- 关键词：TOLL样受体2炎性反应血脑屏障
- 肺炎链球菌性脑膜炎小鼠B7-H3蛋白对巨噬细胞炎性蛋白2mRNA表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨协同信号分子B7-H3对肺炎链球菌性脑膜炎小鼠模型中炎性趋化因子巨噬细胞炎性蛋白2（MIP-2）mRNA表达的影响。方法1．5～2．0个月健康雄性BALB／C小鼠48只，随机分为4组：9g／L盐水组（Ns组）、B7-H3蛋白组（B7-H3组）、肺炎链球菌组（SP组）、肺炎链球菌＋B7-H3蛋白组（联合组），每组12只；经小鼠侧脑室穿刺分别注入9g／L盐水、B7-H3蛋白、肺炎链球菌3型、肺炎链球菌3型＋B7-H3蛋白建立动物模型。注射后6、24h依据loeffler5分制评分方法对各组小鼠进行神经行为评分，然后麻醉处死小鼠，取脑组织，用Real—timePCR方法检测小鼠脑组织内MIP-2mRNA的相对表达量。应用SPSS18．0软件进行统计学分析。结果侧脑室穿刺注射6、24h后各组小鼠神经行为学评分结果：B7-H3组神经行为评分与NS组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；SP组评分较NS组明显降低，差异具有统计学意义（P〈0．05）；联合组较sP组评分更明显降低，差异具有统计学意义（P〈0．05）。Real—timePCR方法检测结果：sP组在注射6h后MIP-2mRNA的相对表达量较NS组升高[（1．210±0．932）比（1．000±0．008）]，但差异无统计学意义（P〉0．05）；在注射24h后sP组MIP-2mRNA的相对表达明显高于Ns组[（12．880±7．792）比（1．000±0．091）]，差异具有统计学意义（P〈0．05）；联合组与sP组比较：6hMIP-2相对表达量增高[（1．240±0．804）比（1．210±0．932）]，但无统计学差异（P〉0．05），24h相对表达量明显升高[（38．760±6．061）比（12．880±7．792）]，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论在肺炎链球菌性脑膜炎模型中，协同信号分子B7-H3使炎性趋化因子MIP-2mRNA的表达上调，促进病情进展。
- 崔伟丽陈旭勤王浙东白艳辉傅丰庆李岩
- 关键词：细菌性脑膜炎肺炎链球菌
- 细菌性脑膜炎患儿脑脊液和血清B7-H3、白细胞介素-1β水平变化及其临床意义被引量：7
- 2012年
- 目的观察急性期细菌性脑膜炎(BM)和病毒性脑炎(VEM)患儿血清和脑脊液中可溶性协同刺激分子B7-H3(CD276)、IL-1β的水平变化,探讨其临床意义。方法收集2010年7月-2011年11月在本院神经内科住院的BM患儿17例、VEM患儿12例的急性期脑脊液和血清。采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组对象血清和脑脊液B7-H3和IL-1β水平,应用SPSS 17.0统计软件对各组进行分析,并对B7-H3和IL-1β进行相关性分析。结果 BM组患儿脑脊液中B7-H3与IL-1β水平均显著高于VEM组(P<0.01,0.05);BM组患儿血清中B7-H3水平明显高于VEM组(P<0.05)。BM组和VEM组血清IL-1β的变化无统计学差异(P>0.05)。BM组脑脊液中B7-H3与IL-1β水平变化呈正相关(r=0.526,P<0.05)。结论协同刺激分子B7-H3在脑脊液和血清中的水平测定具有急性期BM和VEM的鉴别诊断价值;B7-H3与IL-1β水平可以作为BM的早期诊断的参考指标之一。协同刺激分子B7-H3与炎症因子IL-1β参与了细菌性脑膜炎的急性期炎症反应过程。
- 白艳辉陈旭勤王浙东李岩崔伟丽张光波薛建
- 关键词：B7-H3白细胞介素-1Β细菌性脑膜炎病毒性脑炎
