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湖北省自然科学基金(2012FFB05602)
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孙秀峰
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携带p38丝裂原活化蛋白激酶-β基因小分子干扰RNA慢病毒载体构建及其在神经元中的表达鉴定
2013年
目的 构建表达p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)-β基因的小分子干扰RNA(siRNA)载体,并观察感染神经元后表达.方法 p38MAPK-β mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆导入siRNA载体,获得重组质粒p38MAPK-β-短发卡RNA (shRNA),后者与慢病毒试剂共转染神经元细胞,同源重组产生p38MAPK-β-siRNA-Lentivirus.经聚合酶链反应(PCR)鉴定目的基因的表达并测定病毒滴度.结果 PCR结果表明p38 MAPK-β-siRNA-Lentivirus构建正确,病毒滴度为3.5×108 TU/ml.结论 成功构建和筛选出p38MAPK-β-siRNA特异性介导的重组慢病毒载体.
孙秀峰
丁得方
郭晴晴
周伶
李荣春
关键词:
RNA干扰
慢病毒载体
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