国家自然科学基金(30160086)
- 作品数：24 被引量：67H指数：6
- 相关作者：刘建国管晓燕白国辉顾瑜田源更多>>
- 相关机构：遵义医学院中国科学院滨州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科学技术基金贵州省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 转基因防龋生菜叶片转化体系的优化被引量：9
- 2012年
- 目的:优化生菜的基因转化系统,为下一步防龋用转基因植物表达载体质粒转化生菜工作提供实验基础。方法:以6种不同的生菜种子为试材,以1/2 MS为基础培养基,经对出芽率比较,苗龄及直接分化培养基的确定以及抗生素敏感性测试,获得正常再生抗性生菜植株。结果:3～4 d的"意大利"生菜子叶在1/2 MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA培养基上直接分化率最高,生根培养基为1/2 MS,抗生素巴龙霉素(Paromomycin)选择压浓度为50 mg/L。结论:成功确立了防龋用转基因植物表达载体质粒的生菜叶片转化体系,获得了较高的转化频率。
- 陈筑刘建国张燕马欣荣吴家媛唐琳管晓燕顾瑜白国辉
- 关键词：生菜叶片植株再生龋病
- 转基因番茄可食防龋疫苗免疫大鼠的实验研究被引量：5
- 2015年
- 目的用表达变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合蛋白的转基因番茄免疫SD大鼠,检测其免疫原性,探索研制安全、有效的可食用防龋疫苗的可能性。方法选择雌性SD大鼠18只,建立龋齿模型,随机分成3组(n=6),分别为转基因番茄组(实验组)、变异链球菌灭活全菌免疫组(阳性对照组)、非转基因番茄组(阴性对照组),免疫方式为灌胃免疫,每周免疫1次,连续免疫4周。分别于首次免疫前1d和每次免疫1周后采集血液、唾液样品,用酶联免疫吸附实验法检测血清中免疫球蛋白G(IgG)、唾液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)抗体水平;鼠龄70d时处死动物,并取上下颌骨进行龋齿计分。结果免疫后,实验组和阳性对照组大鼠血清中IgG、唾液中SIgA抗体水平与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组和阴性对照组在Dx级外的各级差异有统计学意义(P<0.05)。结论转基因番茄防龋疫苗具有免疫原性,能够诱导实验动物产生有效的免疫应答,降低龋齿的发生。
- 顾瑜刘建国白国辉吴家媛管晓燕陈筑白朋元赵靖
- 关键词：番茄免疫疗法龋齿
- 表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄生物学性状的差异分析被引量：1
- 2014年
- 目的:研究转基因番茄植株及非转基因番茄植株栽培后的各项农艺性状的变化。方法每周记录转基因番茄及其对照植物生长的一般状况、株高、茎粗和最大叶宽等农艺性状。结果转基因番茄植株与非转基因番茄植株生长情况良好,转基因番茄植株的株高、茎粗和最大叶宽经统计学分析与对照组番茄植株比较有统计学差异。结论与对照植株相比,本课题组培养的转基因番茄植株在农艺性状上发生不同程度的改变。
- 白国辉刘建国刘建国管晓燕田源白朋元管晓燕范繁
- 关键词：转基因生物学性状番茄
- 变形链球菌乳酸脱氢酶与霍乱毒素B亚单位嵌合表达质粒的构建及表达
- 目的:构建含变形链球菌乳酸脱氢酶（LDH）和霍乱毒素B亚单位（CTB）嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白。方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT)编码基因ctxB,定向克隆至原核表达质粒pET32a（+）上...
- 张燕刘建国陈筑马欣荣唐琳吴家媛张剑
- 关键词：变形链球菌乳酸脱氢酶霍乱毒素B亚单位原核表达质粒
- 表达嵌合体蛋白PAcP/CTB的转基因番茄免疫BABL/c小鼠的实验研究被引量：5
- 2014年
- 目的:观察表达变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合蛋白(PAcP/CTB)的转基因番茄的免疫原性和安全性。方法:取24 d龄BABL/c小鼠18只,随机分成3组(n=6),分别用转基因番茄果汁(实验组)、变异链球菌灭活全菌(阳性对照组)、非转基因番茄果汁(阴性对照组)灌胃免疫,共4次,每次间隔1周;于首次免疫前1 d和每次免疫后1周称体质量,采集血清、唾液样品,用ELISA法检测血清中IgG、唾液中SIgA抗体水平;最后1次采样后处死所有动物,取心、肝、脾、肺、肾进行组织病理检查。结果:免疫后,实验组和阳性对照组小鼠血清特异性IgG和唾液特异性SIgA水平均明显升高,与阴性对照组相比P<0.05;各组小鼠免疫前后的体质量变化均无统计学差异(P﹥0.05);组织病理学检查,实验组心、肝、脾、肺、肾均未见明显异常。结论:转基因番茄表达的外源目的蛋白PAcP/CTB具有免疫原性和一般安全性。
- 顾瑜刘建国关薇薇管晓燕陈筑白国辉唐琳田源白朋元
- 关键词：转基因番茄变异链球菌C小鼠
- 变形链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒转化生菜
- 目的:将携带变形链球菌葡糖基转移酶编码基因gtfB的植物高效表达载体p2355-gtfB、p2365-gtfB转化到生菜中,为研制有效的可食转基因植物防龋疫苗打下基础。方法:利用根癌农杆菌EHA105介导转化生菜,经抗性...
- 刘建国陈筑张燕马欣荣唐琳吴家媛张剑杨德琴
- 关键词：变形链球菌葡糖基转移酶植物疫苗
- 文献传递
- 转基因番茄防龋疫苗中外源目的基因拷贝数的检测被引量：7
- 2013年
- 目的:采用SYBR Green实时荧光定量PCR方法检测转基因番茄防龋疫苗中外源目的基因的拷贝数。方法:用本课题组前期构建的重组质粒pEAC10、pEPC10作为标准品,SYBR Green实时荧光定量PCR法对含外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB的转基因番茄植株总基因组样本重复检测,取平均值作为目的基因拷贝数。结果:含pacA-ctxB转基因番茄植株外源目的基因的拷贝数为1.3,含pacP-ctxB转基因番茄植株外源目的基因的拷贝数为3.2。结论:构建的转基因番茄植株属低拷贝转基因植物,具有较好的稳定性。
- 白国辉刘建国田源陈筑白朋元韩琪顾瑜管晓燕王海慧
- 关键词：转基因番茄SYBR拷贝数CT值
- 转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c小鼠的实验研究被引量：4
- 2016年
- 目的：观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性。方法：将18只6-8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁（实验组）、非转基因番茄果汁（阴性对照组）、灭活全菌疫苗（阳性对照组）。于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品。ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价。结果：阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异（P〈0.05或P〈0.01）。免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答。
- 关薇薇顾瑜管晓燕吴家媛白国辉田源陈筑杨德琴刘建国
- 关键词：转基因番茄BALB/C鼠
- 变形链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒p2355-gtfB、p2365-gtfB的构建
- 目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒p2355-gtfB、p2365-gtfB,为其转化植物研究奠定物质基础。方法:以真核表达质粒pcDNA3-gtfB为模板,通过PCR方法扩增含多个编码变形链球菌葡糖基转移酶抗...
- 陈筑刘建国马欣荣张燕唐琳吴家媛张剑杨德琴
- 关键词：龋病变形链球菌葡糖基转移酶基因重组防龋疫苗
- 文献传递
- 防龋用转基因番茄生态安全性的评价研究被引量：8
- 2011年
- 目的:观察本课题组培育的防龋用转基因番茄中外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB是否通过花粉和根系分泌物造成基因漂移,初步探讨该转基因番茄防龋疫苗的生态安全性。方法:田间种植转基因番茄,距转基因植株的边缘0.5、1、3、10 m处种植非转基因对照番茄作为基因漂移的受体,开花期自由授粉,结果期在距离转基因番茄植株边缘0.5、1、3、10 m处,各随机收取10株基因漂移受体株番茄果实,采集种子实验室培养,幼苗期采集叶片提取总DNA,用PCR法进行花粉漂移的检测。在转基因番茄植株根部的东、南、西、北方向各取一份土壤样本,提取土壤总DNA,用PCR法进行外源基因根系漂移的检测。结果:距离转基因番茄0.5 m处的2株非转基因番茄第二代植株经PCR检测发现有外源目的基因pacA-ctxB、pacP-ctxB,分别在10株含pacA-ctxB、pacP-ctxB转基因番茄的根际土壤总DNA中未扩增出相应的目的片段。结论:转基因番茄中外源基因pacA-ctxB、pacP-ctxB在田间可通过花粉造成基因漂移,但未观察到该外源基因通过根系分泌物漂移到转基因植株根际的土壤中。
- 白国辉刘建国田源陈筑白朋元韩琦管晓燕张剑
- 关键词：转基因番茄防龋疫苗基因漂移安全性
