广东省科技计划工业攻关项目(2012A030100014)
- 作品数：15 被引量：79H指数：6
- 相关作者：高晓霞章卫民钟兆健王磊陈晓东更多>>
- 相关机构：广东省微生物研究所广东药学院江西农业大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省中国科学院全面战略合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 镰刀菌诱导白木香结香部位总RNA提取方法的研究被引量：3
- 2015年
- 目的白木香树在自然条件下不产生树脂,以自然、微生物或人工方式可使之形成沉香树脂。＂小孔滴注法＂接种镰刀菌人工诱导白木香结香,8个月后野外采集白木香结香部位（分泌黑色树脂的树干组织）,提取其总RNA,为阐明沉香特征产物的代谢途径、揭示人工诱导白木香结香的分子机制奠定基础。方法 ＂小孔滴注法＂人工造香,手工割取白木香结香部位。分别采用CTAB-Li Cl法、Trizol试剂法、RN09试剂盒法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和Qiagen试剂盒法提取总RNA并检测完整性。结果与其它四种提取方法相比,Qiagen试剂盒法提取的RNA条带清晰,OD260/OD280比值在1.8-2.0的范围内。结论 Qiagen试剂盒法适用于镰刀菌人工诱导白木香结香部位总RNA提取,对其它次生代谢物质含量较高的植物中提取总RNA具有一定的借鉴意义。
- 陈晓东周伟平刘少烽陈晓颖钟兆健章卫民高晓霞
- 关键词：白木香RNA提取
- 药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究被引量：6
- 2013年
- 目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重。为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究。方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiCl法、去温浴的改良CTAB-LiCl法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取。结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5 h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的最佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的最佳提取方法。结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S∶18S为1.2～1.4,RIN值为6.8～7.5,并应用于转录组测序。
- 吴宏清王磊郭维高晓霞白玲章卫民
- 关键词：白木香总RNA提取
- 化学诱导后白木香转录组文库的构建与测序被引量：11
- 2013年
- 采用改良异硫氰酸胍-CTAB法对5年生白木香树干经化学诱导后1年的各部分组织进行总RNA提取,提取到的总RNA经富集mRNA、打断、构建测序用cDNA文库后用于转录组测序,测序质量较高,Q20高达97.45%,共获得54 685 634条Clean reads,总测序长度达4 921 707 060 nt,经初步组装,获得190 109条Contigs序列,进一步组装,获得83 467条Unigenes序列,总长度为58 569 625 nt,平均长度为702 nt,N50值高达1 120,大于等于3 000 nt的Unigenes有1 691条,占总Unigenes的2.03%,组装质量较高,使白木香的转录组信息得到较好的保存,为进行白木香结香相关的表达谱分析奠定基础。
- 吴宏清王磊陶美华高晓霞白玲章卫民
- 关键词：白木香化学诱导测序
- SHS-GC-MS联用结合保留指数分析沉香香气成分被引量：4
- 2016年
- 目的建立静态顶空进样-气相色谱-质谱(SHS-GC-MS)联用技术结合保留指数(RI)分析沉香香气成分。方法以白木香、人工沉香和天然沉香为材料,采用SHS-GC-MS技术不经任何化学处理,直接加热提取香气成分进行分析,并应用自动去卷积系统结合保留指数对香气成分进行鉴定。结果天然沉香、人工沉香和白木香中共检出55种挥发性成分,主要为醛、酮、酚醇、酯、萘、烃、2-(2-苯乙基)色酮等化合物。天然沉香、人工沉香中出现7种共有成分,主要为酮类和酚醇类化合物;天然沉香独有7种成分,分别属于酚醇类、酮类和萘类化合物;人工沉香中酮类化合物含量较高,而天然沉香中含量最高的为酚醇类化合物,两者的香气成分存在明显差别。结论该法体现了人工沉香和天然沉香的香气物质基础,可为沉香品质评价提供有效、可行的方法。
- 钟秋萍钟兆健陈晓东袁宁詹松高晓霞陈晓颖
- 关键词：香气成分
- 沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化被引量：7
- 2015年
- 目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA>引物>Taq DNA聚合酶>d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。
- 刘少烽陈晓东朱爽陈晓颖钟兆健章卫民高晓霞
- 关键词：DNA提取ITS2聚合酶链式反应
- 白木香果皮提取物清除DPPH自由基能力及抑制酪氨酸酶活性的研究被引量：2
- 2014年
- 目的:研究白木香果皮不同溶剂提取物清除DPPH自由基的能力及对酪氨酸酶活性的抑制作用,为白木香果皮的应用和开发提供理论依据。方法:以水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚5种极性不同的溶剂,采用回流、超声、冷浸方法提取白木香果皮,采用DPPH法和L-DOPA法分别测定提取物对DPPH自由基的清除能力和酪氨酸酶活性的抑制作用。结果:极性较大的水、乙醇提取物对DPPH自由基均有显著的清除能力,其IC50值分别为26.9、19.9μg/ml;而极性中等的丙酮、乙酸乙酯提取物则对酪氨酸酶活性具有较为明显的抑制作用,其IC50值分别为93.2、122.9μg/ml。结论:白木香果皮提取物具有开发天然有效的自由基清除剂和酪氨酸酶抑制剂的潜力。
- 李浩华章卫民陈玉婵高晓霞严寒静
- 关键词：提取物酪氨酸酶
- 天然沉香中白木香酸含量的高效液相色谱法测定被引量：3
- 2016年
- 目的建立天然沉香中白木香酸含量的分析方法,研究白木香酸与浸出物含量(%)之间的相关性。方法按《中国药典》(2010年版)一部进行醇溶性浸出物的含量测定和理化鉴别。高效液相色谱法采用CNW Athena C_(18)-WP柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)磷酸水溶液(40∶60)为流动相,流速1.0ml·min^(-1),检测波长217nm,柱温35℃。结果白木香酸在2.000~80.00μg·ml^(-1)(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为96.1%,RSD为3.0%(n=6)。在理化鉴别和浸出物含量合格的情况下,天然沉香中白木香酸与浸出物含量之间呈正比关系。结论高效液相色谱法可准确测定天然沉香中白木香酸的含量,结合白木香酸与浸出物含量之间的相关性,为天然沉香的质量评价提供依据。
- 钟兆健樊云飞雷智东潘清灵周欣刘岱琳章卫民高晓霞
- 关键词：浸出物
- 缺素对土沉香幼苗根系生长和叶绿素荧光参数的影响被引量：9
- 2015年
- 采用营养液培养法,以土沉香幼苗为试验材料,研究在缺乏9种营养元素(即-N、-P、-K、-Ca、-Mg、-Fe、-Mn、-B、-Zn)环境条件下,苗木的根系生长、根系活力和叶绿素荧光参数的变化和响应机制。结果表明:(1)与全素对照相比,不同缺素处理下的土沉香幼苗根系生物量值和根系活力显著下降,其中,-Ca和-K处理影响最显著,其次为-Fe处理;(2)不同缺素处理稳态荧光产量(Ft),光适应时最大荧光(Fm′),叶绿体光系统II(PSⅡ)在部分反应中心关闭下实际光化学量子产量(Yield),非循环电子传输速率(ETR),光下最小荧光(Fo′)以及潜在最大光化学量子产量(Fv/Fm)值与CK处理差异显著,其中,-P处理Ft值最小,Fe和P元素对Fm′抑制最明显,-Fe处理对Yield值影响最大,-Mg处理的ETR值最小,-Fe处理抑制Fo′值最明显,-P处理抑制Fv/Fm值最明显。
- 贾晓红周再知马华明梁坤南黄桂华余雪标
- 关键词：土沉香缺素根系生物量根系活力叶绿素荧光参数
- 白木香果皮化学成分及其生物活性研究被引量：4
- 2013年
- 目的研究白木香Aquilaria sinensis果皮的化学成分及其细胞毒性与抗菌活性。方法采用正、反相硅胶柱、凝胶柱和薄层制备等色谱技术和重结晶进行分离纯化,通过波谱分析进行结构鉴定;以神经胶质瘤细胞SF-268、乳腺癌细胞MCF-7、大细胞肺癌细胞NCI-H460、肝癌细胞HepG-2为供试细胞株,采用SRB染色法对化合物进行体外细胞毒活性研究;以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌株,采用刃天青染色法对化合物进行体外抗菌活性研究。结果从白木香果皮中分离到10个化合物,经波谱数据分析分别鉴定为isorhamnetin 3-O-(6″-O-(Z)-p-coumaroyl)-β-D-glucopyranoside(1)、buddlenoid A(2)、7-甲氧基-4′-羟基异黄酮(3)、木犀草素(4)、反式对香豆酸乙酯(5)、木香烃内酯(6)、表木栓醇(7)、豆甾醇(8)、对羟基苯甲酸甲酯(9)、邻苯二酚(10)。结论化合物1～3、5、6、9、10为首次从该植物中分离得到,化合物1～3、5、6为首次从沉香属植物中分离得到;其中化合物6对上述4种肿瘤细胞株表现出较好的抑制作用,化合物1、4对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有一定的抗菌活性。
- 张兴陶美华陈玉婵高晓霞谭毓治章卫民
- 关键词：白木香木香烃内酯细胞毒活性抗菌活性
- 白木香倍半萜合成酶基因As-SesTPS的克隆及生物信息学与表达分析被引量：13
- 2014年
- 目的从白木香Aquilaria sinensis总RNA中克隆倍半萜合成酶基因,并对其进行生物信息学及表达分析。方法对白木香总RNA进行反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得完整的开放阅读框(ORF)。运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析。通过半定量PCR检测该基因在白木香树干中不同部位的表达情况。结果获得As-SesTPS基因,ORF长1 629 bp,编码542个氨基酸,与葡萄Vitis vinifera的大根香叶烯-D合成酶[(-)-germacrene D synthas]相似性最高,且包含RRx8W和DDxxD的保守序列。As-SesTPS蛋白无跨膜区域,定位于细胞质中,且仅在白木香结香部位表达。结论首次从白木香中克隆得到可能编码大根香叶烯-D合成酶的基因,为白木香倍半萜生物合成代谢途径的研究提供参考。
- 吴宏清王磊何欣白玲高晓霞严寒静章卫民
- 关键词：白木香基因克隆生物信息学基因表达分析
