国家自然科学基金(30500497)
- 作品数：8 被引量：22H指数：3
- 相关作者：伍长学石应康马建旸张尔永杨思远更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 心肌条件培养液对体外骨髓间充质干细胞向心肌细胞诱导分化的影响
- 2008年
- 目的:观察心肌培养液中可溶性细胞因子对体外骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞诱导分化过程的影响;方法:10μmol/L 5氮胞苷(5-aza)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化后,实验分为两组:5-aza诱导组常规培养基培养,5-aza诱导+心肌条件培养组以1∶1混合的心肌条件培养液培养,观察与比较两组细胞形态,免疫细胞化学法和western blot技术分析心肌特异蛋白表达。结果:5-aza组细胞排列紊乱,5-aza诱导+心肌条件培养组细胞呈集落样排列,可见肌管形成,自诱导2周开始两组均见肌钙蛋白I(troponin I)阳性细胞,而troponin I、结蛋白(desmin)、连接蛋白-43(connexin-43)在诱导2周开始表达,3、4周达高峰,各时间点两组蛋白表达没有明显差异;结论:心肌条件培养液对心肌细胞的体外分化过程没有促进作用,但是可以加强体外诱导生成的心肌样细胞之间的有机排列。
- 伍长学马建旸杨思远张尔永石应康
- 关键词：间充质干细胞分化细胞排列
- 骨髓间充质干细胞向心肌诱导过程中GATA-4和Nkx2-5基因的表达被引量：7
- 2008年
- 目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,心肌转录因子GATA-4和Nkx2.5基因表达的变化规律,探讨其分子生物学机理。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代以10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导,分别于第1、2、3、4周收集细胞,免疫细胞化学法和Western blot法检测肌钙蛋白I(troponinI,TnI)表达,RT-PCR法分析GATA-4和Nkx2.5基因的表达。结果诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周开始出现TnI阳性细胞,第1周开始即有GATA-4和Nkx2.5基因表达,逐渐增强,第3周达到高峰,持续到第4周。结论GATA-4和Nkx2.5基因表达在骨髓间充质干细胞向心肌样细胞诱导过程中逐渐增强,可能参与调控心肌细胞的分化过程。
- 伍长学张尔永杨思远马建旸安琪石应康
- 关键词：骨髓间充质干细胞NKX2.5基因心肌细胞
- 低压脉动电刺激对体外心肌诱导分化过程中GATA-4和NKx2.5基因表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,低压脉动电刺激对心肌转录因子GATA-4和Nkx2.5基因表达的影响,探讨电刺激对骨髓间充质干细胞向心肌分化过程的影响及其分子生物学机理。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代MSCs,对照组以10μmol/L5-氮胞苷(5-aza)诱导,电场组诱导后施加1.5V/cm电场刺激,分别于第1、2、3、4周收集细胞,免疫细胞化学法和western blot技术检测troponin I(TnI)表达,RT-PCR法分析GATA-4和Nkx2.5基因的表达。结果诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周开始出现TnI阳性细胞,TnI蛋白在诱导后第2周开始表达,第3、4周明显增强。GATA-4和Nkx2.5基因第1周开始表达,第2周增强,第3周达到高峰,持续到第4周。电场刺激组细胞排列更加紧密,诱导后各时间点GATA-4和Nkx2.5基因表达比对照组明显增强。结论脉动电场刺激促进MSCs向心肌细胞的分化过程,GATA-4和Nkx2.5基因可能调节该促进过程。
- 伍长学张尔永杨思远马建暘安琪赁可石应康
- 关键词：电场刺激NKX2.5基因心肌细胞
- 心肌细胞周期调控方法的研究进展
- 2010年
- 传统认为,哺乳动物心脏细胞在出生后不久即失去了有丝分裂的能力,成为终末分化的有丝分裂后的细胞。然而,近年研究表明,人类心脏完全有可能在损伤一段时间后,通过心肌细胞分裂和再生进行自然的修复。对心肌细胞在蛋白分子和基因水平上进行调节,可重新激活和提高心肌细胞分裂和增殖的潜能,以替代坏死及纤维化的心肌细胞,有望成为缺血性心脏病、心力衰竭等患者促进心脏自我修复,改善心脏功能的新的治疗方向。现将近年来对成熟心肌细胞周期进行调控,从而诱导其重新进入有丝分裂的研究进展进行了综述。
- 侯江龙马建旸
- 关键词：心肌细胞细胞周期
- 新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进被引量：8
- 2009年
- 目的:对新生大鼠心肌细胞分离培养方法进行改进,以期获得较高纯度和活力的心肌细胞;方法:采用胶原酶消化法分离大鼠心肌细胞,控制消化时间、消化温度、搅拌速度、离心次数和速度等,结合贴壁分离和BrdU干预纯化心肌细胞,流式细胞仪分析肌钙蛋白I(troponin I,TnI)表达,荧光探针进行胞浆游离钙离子染色;结果:多数心肌细胞自动收缩,逐渐聚集形成肌管,troponin I阳性率达92%,所有心肌细胞钙离子染色阳性,并随细胞收缩呈周期性变化;结论:该方法分离培养的心肌细胞具有较高的纯度和活力。
- 伍长学范英李新廖斌石应康詹福生
- 关键词：心肌细胞原代培养胶原酶
- 低压脉动电刺激大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化:希望验证电学因素在心肌发育过程中作用被引量：3
- 2009年
- 背景:电学微环境是心肌细胞所处微环境的要素之一。在体外干细胞向心肌细胞诱导分化的过程中,模拟心肌微电学环境的脉动性电流刺激是否有助于心肌分化呢?目的:大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞诱导分化过程中,验证课题提出的低压脉动电刺激对心肌分化过程影响的假设,并分析其分子生物学机制。设计、时间及地点:细胞-基因学实验,于2005-09/2007-03在四川大学老年病研究室完成。材料:4周龄SD大鼠5只,购自四川大学华西医学中心动物实验室中心。方法:密度梯度离心+贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,设立2组,5-氮胞苷诱导组单纯给予10μmol/L5-氮胞苷诱导;5-氮胞苷诱导+电刺激组在5-氮胞苷诱导基础上,对骨髓间充质干细胞施加电场刺激,刺激参数选择1.5V/cm电压,2ms方波,频率1Hz,刺激时间为2h/d。主要观察指标:分别于诱导第1,2,3,4周收集细胞,western blot技术检测TroponinⅠ,Desmin,Connexin-43蛋白的表达,RT-PCR法分析GATA-4,NKx2.5,MEF2C基因的表达。结果:诱导后细胞停止生长,并倾向集落化。两组均在诱导第2周开始表达TroponinⅠ,Desmin,Connexin-43蛋白,第3,4周表达明显增强。两组均在诱导第1周开始表达GATA-4,NKx2.5,MEF2C基因,并逐渐增强,至第3周达高峰,持续到第4周。在同一时间点,5-氮胞苷诱导+电刺激组蛋白、基因的表达量均显著高于5-氮胞苷诱导组(P<0.01)。结论:GATA-4,NKx2.5和MEF2C基因调控心肌细胞的形成,而低压脉动电场刺激通过上调其表达进而促进大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化过程。课题结果验证了电学因素在心肌发育过程中具有重要意义的理论假设。
- 伍长学马建旸赁可石应康
- 关键词：电场刺激骨髓间充质干细胞心肌细胞
- 骨髓间充质干细胞向心肌细胞诱导过程中脉动电流刺激对肌细胞增强因子2C基因表达的影响被引量：4
- 2008年
- 背景:一些研究发现电刺激可以改变成熟心肌细胞的分布和电生理特性,其是否对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的过程产生影响目前还不清楚。目的:在诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化过程中,观察低压脉动电刺激对肌细胞增强因子2C基因表达的影响。设计、时间及地点:对比观察电刺激细胞学体外实验,于2005-09/2007-03在四川大学老年病研究室完成。材料:清洁级4周龄雄性SD大鼠5只,由四川大学华西医学中心动物实验室中心提供。诱导剂5-氮胞苷为Sigma产品。使用一次性100mL培养瓶、镍钛合金金属丝、心脏起搏器和连接导线设计制作电场。方法:密度梯度离心+贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第3代按1×107L-1接种到电场内,细胞爬满80%后,加入终浓度为10μmol/L5-氮胞苷进行诱导。分别于诱导第1,2,3,4周收集细胞,分为2组:刺激组施加电场刺激,刺激参数选择1.5V/cm电压,2ms方波,频率1Hz,刺激2周;对照组单纯以5-氮胞苷诱导。主要观察指标:免疫细胞化学法和westernblot技术检测肌钙蛋白I表达,RT-PCR法分析肌细胞增强因子2C基因的表达。结果:诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周两组均开始出现肌钙蛋白I阳性细胞,第3、4周明显增强,诱导各时间点刺激组肌钙蛋白I表达量均显著高于对照组(P<0.05)。诱导第1周两组均开始表达肌细胞增强因子2C基因,第2周明显增强,第3周达高峰,持续到第4周,诱导各时间点刺激组肌细胞增强因子2C基因的表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:肌细胞增强因子2C基因可能参与调控心肌细胞的形成过程,而电场刺激通过上调肌细胞增强因子2C基因的表达,进而促进肌钙蛋白I的表达和心肌细胞的形成。
- 伍长学杨思远马建旸张尔永安琪赁可石应康
- 关键词：骨髓间充质干细胞电场刺激
- 成熟心肌细胞有丝分裂周期调控的研究进展
- 2008年
- 传统认为,哺乳动物心脏细胞在出生后不久即失去了有丝分裂的能力,成为终末分化的有丝分裂后细胞。然而,近年来的研究表明,人类心脏完全有可能在损伤一段时间后通过心肌细胞分裂和再生进行自然的修复。在心肌细胞蛋白分子和基因水平进行调节,重新激活和提高心肌细胞的分裂和增生的潜能,以替代坏死及纤维化的心肌细胞,有望成为缺血性心脏病、心力衰竭等疾病患者促进心脏自我修复,改进心脏功能的新治疗方向。
- 刘司寰马建旸
- 关键词：心肌细胞细胞周期
