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组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA影响U251细胞中p21稳定性的机制: 2013年; 目前已开发的组蛋白去乙酰化酶抑制剂如SAHA表现出了广泛的临床应用前景。然而,其作用机制有待进一步阐明。该研究旨在探明SAHA对p21蛋白稳定性的影响。运用Real-time PCR、免疫共沉淀、泛素化降解实验、免疫印迹和流式细胞技术分析了SAHA对p21 mRNA和蛋白水平、稳定性和泛素化水平的影响;并分析了SAHA通过调节GSK-3β的活性影响p21蛋白稳定性及细胞周期的进程。结果发现,SAHA不但可以上调p21 mRNA水平,还可以稳定其蛋白水平;而且SAHA通过影响GSK-3β的活性降低p21蛋白泛素化水平,从而抑制其降解,并因此改变细胞周期进程,这表明SAHA可以通过抑制GSK-3β的活性增加p21蛋白的稳定性,维持其蛋白水平从而发挥SAHA的生物学效应。该研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。; 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军; 关键词：SAHA 胶质瘤细胞 P21 GSK-3Β

全反式维甲酸协同DAPT抑制胶质瘤干细胞的自我更新被引量：1: 2013年; 前期研究脑表明,脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)是胶质瘤发生和发展的重要因素,探索靶向干预GSCs生长有可能成为脑胶质瘤治疗的有效途径之一。该研究旨在阐明两种药物ATRA和γ-分泌酶抑制剂DAPT协同抑制GSCs自我更新的生物学效应。通过用台盼蓝排染法、克隆球形成试验和免疫印迹分析了两种药物的单独使用或联用对GSC样细胞PGC1和PGC2生长、成球能力和自我更新以及干细胞标志物表达的影响。结果发现,单独使用ATRA对PGC1生长有一定的抑制作用,而对PGC2生长几乎没有影响;DAPT对PGCs的生长抑制作用明显强于ATRA。高浓度ATRA(80μmol/L)能诱导PGCs的分化,降低PGCs成球大小,且成球效率降至5%～8%,而正常对照组为32%～35%;同样,DAPT(40μmol/L)也能降低PGCs成球大小,且成球效率降至2%～3%;低浓度ATRA(20μmol/L)和DAPT(5μmol/L)对PGCs自我更新能力和干性没有明显影响,而联合使用后其明显降低PGCs的成球大小,且成球效率降至3%～5%,促进细胞凋亡,并且明显抑制了干细胞标志物Nestin、CD133、Sox2、Oct4的表达,提高了分化标志物GFAP的表达。该研究证明了低浓度的ATRA和DAPT能协同抑制脑胶质瘤干细胞PGCs的自我更新。研究结果将为脑胶质瘤的临床研究提供实验依据。; 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军; 关键词：DAPT 脑胶质瘤干细胞自我更新

干扰Hmgb3表达对肺腺癌A549细胞增殖的影响: 2014年; 目的构建针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,检测诱导稳定感染细胞株干扰序列的干扰效率及其对A549细胞增殖的影响。方法设计Hmgb3及对照GFP shRNA序列,装入Tet-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染A549细胞,嘌呤霉素筛选稳定株,筛选最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,MTT实验检测其对A549细胞增殖的影响。结果构建的Hmgb3shRNA慢病毒稳定细胞株诱导后可显著抑制Hmgb3的表达,干扰效率达73%(P<0.05),而对照组无明显干扰效果(P=0.721),对照组的增殖率为94%,实验组的增殖率下降为46%(P<0.05)。结论成功构建了针对Hmgb3的shRNA诱导型慢病毒,并有效沉默A549细胞靶基因,干扰Hmgb3对肺癌细胞的增殖有一定的抑制作用。; 罗贤琴唐华容熊二梦王洁金洁邵根宝龚爱华吴朝阳; 关键词：RNA干扰慢病毒 A549细胞

ADAM17调控Hippo信号转导通路对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响: 2016年; 为探讨去整合素-金属蛋白酶17(disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对人胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其调控机制,该研究用ADAM17 sh RNA质粒转染ADAM17高表达的胶质瘤细胞U87MG、U251MG,用过表达ADAM17载体转染ADAM17低表达细胞SW1783,q-PCR和Western blot检测ADAM17表达水平的变化,同时检测ADAM17和Hippo信号通路中相关蛋白质表达水平,CCK-8法分析细胞增殖能力并绘制生长曲线,划痕实验检测细胞迁移率。结果表明,下调ADAM17后,U87MG、U251MG细胞增殖和迁移能力减弱,而Hippo信号通路中MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平升高;上调ADAM17后,SW1783细胞增殖和迁移能力增强,而MST2、p-MOB1、p-YAP蛋白表达水平降低。结果说明,ADAM17在脑胶质瘤细胞的增殖和迁移中发挥了重要作用,这可能是通过抑制Hippo信号通路来实现的,MST2被抑制,p-MOB1水平降低,从而YAP的磷酸化水平也降低,促进了胶质瘤细胞的增殖和迁移。; 张春利韩秀熊二梦彭琬昕杜凤仪周海浪龚爱华; 关键词：ADAM17 胶质瘤细胞增殖细胞迁移

SAHA诱导的p21表达致U251MG细胞抗凋亡效应被引量：4: 2013年; 目的探讨SAHA诱导的p21在脑胶质瘤细胞U251MG中的生物学作用。方法采用免疫印迹技术、RAN干扰技术和流式细胞技术分析了p21的表达水平与SAHA引起的U251MG细胞周期阻滞和细胞死亡的相关性。结果与对照组相比较,p21-ShRNA组明显提高了U251MG细胞凋亡的比例,达到45%左右,活化的凋亡相关蛋白Caspase-3,-8,-9表达水平明显增加;p21-ShRNA组细胞周期调控蛋白cdc25c、cdc2的磷酸化水平和总蛋白质水平也明显上调,clycinB1和磷酸化的H3水平明显提高。结论在SAHA处理条件下,p21下调使U251MG细胞阻滞于细胞周期G2/M期,促进了细胞凋亡。; 龚爱华熊二梦张严杜凤移彭琬昕邵根宝金洁程建军; 关键词：SAHA 胶质瘤细胞 P21 组蛋白去乙酰化酶

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国家重点实验室开放基金(90-13-05)

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