国家自然科学基金(81172480)
- 作品数：12 被引量：42H指数：3
- 相关作者：王言奎于啸王宁于风胜毕晓宁更多>>
- 相关机构：青岛大学医学院附属医院青岛大学青岛市妇女儿童医疗保健中心更多>>
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- Hsa-miR-6841-3p对宫颈癌细胞系Caski增殖及侵袭转移的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨miRNA-6841-3p对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:将miRNA-6841-3p模拟物、miRNA-6841-3p抑制物转染至宫颈癌细胞系Caski。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞系Caski转染后miRNA-6841-3p mRNA以及其预测靶基因TFF3的转录表达。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell小室检测细胞体外侵袭转移能力。划痕实验检测细胞迁移能力。结果:实时荧光定量PCR显示,miRNA-6841-3p模拟物转染组与miRNA-6841-3p模拟物对照组相比,miRNA-6841-3p mRNA表达明显上调(P<0.01),miRNA-6841-3p抑制物转染组miRNA-6841-3p mRNA转录表达明显受抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。其预测靶基因TFF3 mRNA转录表达在miRNA-6841-3p模拟物转染组明显低于抑制物转染组(P<0.01)。与miRNA-6841-3p抑制物转染组比较,转染miRNA-6841-3p模拟物后,宫颈癌细胞系Caski细胞活性、迁移侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论:上调miRNA-6841-3p表达可明显抑制宫颈癌细胞系Caski增殖,抑制其迁移、侵袭能力,其作用机制可能通过抑制预测靶基因TFF3表达实现。
- 裴桂华殷复粉王宁孙欣于啸孙业武于风胜王言奎
- 关键词：宫颈癌CASKI细胞增殖
- 宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响被引量：20
- 2015年
- 背景与目的:丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶31(serine/threonine kinases 31,STK31)基因在人类多种癌症中扮演重要角色,且STK31基因的表达受其启动子及第一外显子区甲基化状态的影响;病毒感染与肿瘤组织中某些抑癌基因启动子区高甲基化有关。本研究旨在探讨宫颈癌细胞系中HPV16 E6、E7及E6/E7癌基因对STK31基因甲基化状态及表达的影响,以及不同种类甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)基因在STK31基因甲基化中的潜在作用。方法:构建外源性HPV16 E6、E7以及E6/E7基因共表达慢病毒,分别感染人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)阴性宫颈癌细胞系HT-3及C33A,获得稳定转染的细胞系;采用亚硫酸氢盐基因组测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS)和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测3种HPV阳性宫颈癌细胞系HeLa、SiHa和CasKi以及HPV阴性宫颈癌细胞系HT-3和C33A转染前后STK31基因的甲基化状态;RT-PCR及蛋白[质]印迹法(Western blot)检测上述宫颈癌细胞系中STK31基因的表达以及DNMT1、DNMT2、DNMT3α、DNMT3b和DNMT3L基因在HPV16转染前后宫颈癌细胞系及HPV阳性、HPV阴性宫颈癌组织中的表达情况。结果:外源性HPV16 E6、E7以及E6/E7基因可在HPV阴性宫颈癌细胞系中稳定表达。3种HPV阳性细胞系HeLa、SiHa和CasKi中STK31基因呈低甲基化状态,STK31 mRNA及蛋白质表达阳性;2种HPV阴性细胞系HT-3、C33A中STK31基因则表现为高甲基化状态,STK31 mRNA及蛋白质表达缺失;与未感染慢病毒HT-3和C33A细胞系比较,外源性HPV16 E7以及E6/E7表达的HT-3和C33A细胞系STK31基因甲基化程度降低,其mRNA及蛋白质重新表达。DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因在HT-3E6/E7和C33AE6/E7细胞系中mRNA水平分别高于HT-3空载细胞系和C33A空载细胞系,差异有统计学意义(P<0.001)。DNMTl、DNMT3α和DNMT3b基因的mRNA水平在HPV16阳性宫颈癌组织中的表达高于其在HPV阴性宫颈癌组织中的表达,差异有统计
- 殷复粉王宁于啸毕晓宁徐小惠王言奎
- 关键词：宫颈癌生物标志
- 宫颈癌组织ITIH5基因启动子及第1外显子甲基化状态与其临床病理特征关系的研究被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨宫颈癌组织中人类间胰蛋白酶H5重链(ITIH5)基因启动子及第1外显子区甲基化状态对ITIH5表达的影响,分析ITIH5基因甲基化程度与临床病理特征的关系。方法:选取50例宫颈癌组织和20例正常宫颈组织作为研究对象,采用甲基化特异PCR(MSP)和亚硫酸盐基因组测序法(BGS)检测ITIH5基因启动子及第1外显子区甲基化状态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测ITIH5 mRNA表达。结果:宫颈癌组织中ITIH5基因甲基化率明显高于正常宫颈组织(χ2=16.104,P=0.000),ITIH5 mRNA表达量明显低于正常宫颈组织(t=3.640,P=0.001)。宫颈癌组织中ITIH5甲基化率与淋巴结转移密切相关(校正χ2=4.562,P=0.029),而与临床分期、组织病理学分级、脉管浸润、深肌层浸润、病理类型之间无显著相关性(P>0.05)。结论:ITIH5基因启动子及第1外显子区Cp G岛的高甲基化可能是宫颈癌组织ITIH5基因表达降低甚至沉默的原因。ITIH5基因可能成为宫颈癌的候选抑癌基因,可能与宫颈癌的发生和淋巴结转移有关。
- 仵妍毕晓宁王言奎
- 关键词：宫颈癌甲基化
- TLRs多态性与宫颈癌易感性之间的关系被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨汉族人群TLRs基因多态性与宫颈癌易感性之间的关系。方法:选取102例宫颈癌患者及100例健康查体正常人作为研究对象,PCR直接鉴定TLR2(-196 to-174 del)基因型;PCR结合限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测分析TLR3c.1377C/T,TLR4 Asp299Gly、Thr399Ile,TLR9 1486T/C及G2848A位点多态性;然后选取具有代表性的标本进行测序,对酶切结果进行验证。结果:宫颈癌组和健康对照组中均未发现TLR4 Asp299Gly和Thr399Ile两个位点存在单核苷酸多态性。病例组和对照组的TLR2(-196 to-174 del)、TLR3c.1377C/T、TLR9 1486T/C、G2848A的基因型和等位基因频率未见显著差异。结论:TLR2(-196 to-174 del),TLR3c.1377C/T,TLR4Asp299Gly、Thr399Ile,TLR9 1486T/C、G2848A多态性与宫颈癌易感性无明显关系。
- 毕晓宁徐小惠于啸王宁殷复粉王言奎
- 关键词：TLR多态性宫颈癌
- 宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态的研究被引量：2
- 2013年
- 背景与目的:抑癌基因Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子及第1外显子区CG位点高甲基化导致该基因沉默与多种恶性肿瘤的发生发展相关。本研究旨在探讨宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态以及甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza-dc)作用对RASSFIA基因表达的影响。方法:采用5μmol/L(低浓度)和10μmol/L(高浓度)的5-Aza-dc作用于HeLa、Caski、HT-3以及C-33A等4种宫颈癌细胞系,分别采用甲基化特异PCR(methylation-specific PCR,MSP)和亚硫酸盐基因组测序法(bisulfite genome sequencing,BGS)检测5-Aza-dc处理前后RASSF1A基因启动子及第1外显子区甲基化状态,RT-PCR检测干预前后RASSF1A基因mRNA的转录表达。结果:HeLa和Caski两种HPV阳性细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区均呈低甲基化状态,mRNA表达阳性。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,mRNA表达未见明显改变(F HeLa=3.003,P=0.125;F Caski=0.045,P=0.956)。HT-3和C-33A两种HPV阴性宫颈癌细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区则表现为高度甲基化状态,mRNA表达受到抑制。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,HT-3和C-33A细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区CG位点甲基化程度降低,检测到其mRNA表达,高浓度5-Aza-dc作用组表达水平明显高于低浓度组和细胞对照组(F HT-3=18.002,P=0.03;F C-33A=17.179,P=0.03),LSD-t检验显示差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV阳性和HPV阴性宫颈癌细胞系中RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态不同;RASSF1A基因启动子及第1外显子区的高甲基化可抑制该基因表达;5-Aza-dc处理可使RASSF1A基因启动子及第1外显子区去甲基化,重新激活基因的表达,这种作用在一定范围内有剂量依赖性。
- 汪姗姗王宁于啸杨晨曦闫丽萍王言奎
- 关键词：TA克隆
- TFF3过表达促进宫颈腺癌Hela细胞增殖迁移侵袭功能及其机制研究
- 2020年
- 目的:探讨TFF3基因过表达对宫颈腺癌Hela细胞增殖、迁移、侵袭的影响及相关机制。方法:构建重组慢病毒(LV-TFF3)感染宫颈腺癌细胞系Hela,应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及其溶剂DMSO分别处理TFF3过表达的Hela细胞。实时荧光定量PCR检测TFF3表达,CCK-8实验验证TFF3对Hela细胞增殖能力的影响,细胞划痕实验和Transwell实验检测TFF3对细胞迁移和侵袭功能的影响,Western blot法检测TFF3过表达对PI3K/Akt/Twist1信号通路及EMT相关蛋白表达的影响。结果:重组慢病毒(LV-TFF3)感染宫颈腺癌细胞系Hela后,TFF3基因表达水平明显增高(P<0.01),细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强(P<0.05),p-Akt、Twist1和Vimentin蛋白表达水平明显增高,E-Cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。TFF3过表达的Hela应用LY294002处理后细胞功能明显降低(P<0.05),p-Akt、Twist1和Vimentin表达水平下降,E-Cadherin表达水平升高(P<0.05)。结论:TFF3过表达可能通过激活PI3K/Akt/Twist1信号转导通路,增强宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并引发EMT,促进宫颈腺癌的恶性生物学行为。
- 刘海梅于风胜王文杰王雅迪殷广洁孙欣王宁王言奎
- 关键词：宫颈腺癌HELA细胞
- TFF3激活PI3K/Akt通路参与宫颈腺癌的发病机制被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨TFF3通过激活PI3K/Akt信号通路调控宫颈腺癌发生发展的机制。方法:TFF3细胞因子和PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)或两者共同处理Hela细胞,CCK-8法检测Hela细胞增殖能力,Transwell小室观察细胞迁移能力,流式细胞学方法检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白Akt及其激活状态蛋白p-Akt的表达。结果:与对照组相比,TFF3处理后Hela细胞的增殖和迁移能力明显提高,细胞凋亡减弱,差异有统计学意义(P<0.05);LY294002处理后Hela细胞的增殖及迁移能力明显降低,细胞凋亡增多,差异有统计学意义(P<0.05);TFF3+LY294002处理后Hela细胞的增殖、迁移能力及细胞凋亡与TFF3和LY294002处理组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果表明,TFF3能激活p-Akt基因表达。结论:TFF3能通过提高p-Akt蛋白表达激活PI3K/Akt信号通路,从而参与调节宫颈腺癌细胞的恶性行为。
- 徐昕于风胜殷广洁孙业武孙欣于啸王宁王言奎
- 关键词：PI3K/AKT信号通路宫颈腺癌HELA细胞
- 宫颈癌细胞系及宫颈组织PTEN基因启动子区甲基化状态的检测与分析被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨宫颈癌细胞系及宫颈组织中PTEN基因启动子甲基化状态对其表达的影响。方法:选取体外培养的4种宫颈癌细胞系HeLa、Caski、C-33A、HT-3,以及18例宫颈癌组织和8例宫颈正常组织为研究对象。应用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测PTEN基因启动子甲基化状态;采用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理体外培养的4种宫颈癌细胞系,RT-PCR法检测处理前后PTEN基因mRNA转录表达的差异,并与本课题组前期5-Aza-dC作用前后4种细胞系表达谱芯片PTEN基因的差异进行比较分析。结果:4种宫颈癌细胞系、宫颈癌组织及正常宫颈组织中PTEN基因启动子区均呈低甲基化状态;且宫颈癌组织与正常宫颈组织PTEN基因启动子甲基化水平无显著差异(T=34.5,P=0.720)。表达谱芯片中4种细胞系PTEN基因差异倍数均>0.5且<2。RT-PCR显示,5-Aza-dC处理前后4种细胞系中PTEN mRNA表达无显著差异(HeLa:t=0.384,P=0.738;Caski:t=0.073,P=0.949;C-33A:t=0.097,P=0.931;HT-3:t=0.073,P=0.542)。结论:宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中未发现PTEN基因启动子区CpG岛的高甲基化,PTEN基因表达的差异与该基因启动子区甲基化无显著相关性。
- 杨晨曦王宁张婷汪姗姗闫丽萍王言奎
- 关键词：宫颈癌甲基化
- 表达谱基因芯片筛选子宫颈癌甲基化差异基因的研究被引量：1
- 2013年
- 目的筛选人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞系中由于HPV感染诱导沉默的特异抑癌基因,探讨HPV感染可能导致抑癌基因发生甲基化的机制。方法选取HPV阳性HeLa和Caski宫颈癌细胞系和HPV阴性C-33A和HT-3宫颈癌细胞系,分别经去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR,Aza)处理,采用Agilent人类全基因组表达谱芯片检测Aza处理前后细胞全基因组的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证芯片结果,亚硫酸氢盐-基因组测序法(BGS)检测目的基因甲基化水平。结果①芯片结果显示:HPV阳性和阴性细胞系共721条基因表达存在差异。②用药后表达显著上调的基因:HeLa细胞系825条,Caski细胞系815条,C-33A细胞系1023条,HT-3细胞系1196条。HeLa和Caski细胞系共表达上调的基因为182条,剔除阴性细胞系共表达上调基因,筛选出阳性细胞系HPV相关表达上调基因97条,与阴性细胞系基因表达比较,差异有统计学意义(P<0.01),最终筛选出13条差异表达基因,其中具有功能者7条。③RT-qPCR结果:筛选基因在宫颈癌细胞系中的表达与芯片检测结果一致;HPV阳性宫颈癌细胞系中甲基化频率明显高于阴性细胞系,支持芯片结果。结论筛选出的7条新的潜在抑癌基因可能由于HPV感染诱导发生甲基化而沉默,为进一步探讨HPV诱导抑癌基因发生甲基化的机制提供实验基础。
- 张婷于啸王宁汪姗姗王言奎
- 关键词：人类乳头瘤病毒抑癌基因甲基化
- 高危子宫内膜癌淋巴结转移危险因素及预后分析被引量：4
- 2021年
- 目的探讨影响高危子宫内膜癌(HREC)淋巴结转移的危险因素及其预后情况。方法回顾性分析2009—2017年青岛大学附属医院手术分期后诊断为HREC的183例病人的临床资料及随访结局。结果术前血清CA125水平、脉管癌栓及深肌层浸润是影响盆腔淋巴结(PLN)转移的独立危险因素;术前血清CA125水平、PLN转移是影响腹主动脉旁淋巴结(PALN)转移的独立危险因素。以CA125>24.63 kU/L作为PLN转移的预测指标时,灵敏度为82.1%,特异度为61.9%;以CA125>24.63 kU/L作为PALN转移的预测指标时,灵敏度为88.2%,特异度为58.9%。PLN转移者及PLN未转移者的5年总体生存率(OS)分别为44.62%和75.80%,差异具有统计学意义(χ^2=8.634,P<0.01);PALN转移者及PALN未转移者的5年OS分别为32.94%和81.46%,差异具有统计学意义(χ^2=18.883,P<0.01)。结论存在淋巴结转移的HREC病人预后较差,术前对血清CA125水平、脉管癌栓及深肌层浸润的评估有助于预测淋巴结转移。
- 王雅迪王文杰李阳于啸于风胜王言奎
- 关键词：子宫内膜肿瘤淋巴转移预后
