珠海市科技攻关计划项目(PC20071080)
- 作品数：2 被引量：14H指数：2
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- 相关机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：珠海市科技攻关计划项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 绿色木霉BGL Ⅰ基因在酿酒酵母中的克隆表达及其纤维素乙醇发酵被引量：7
- 2009年
- 采用反转录PCR方法从绿色木霉AS3.3711的总mRNA中获得了编码β-葡萄糖苷酶Ⅰ(BGLⅠ)的基因bgl1。序列测定表明该基因片段长2 235 bp,编码744个氨基酸残基,与里氏木霉的bgl1序列完全相同。将其插入高拷贝数整合型表达载体PScIKP,构建了重组质粒PScIKP-bgl1。线性化后转化工业酿酒酵母AS2.489菌株,利用高浓度G418筛选高抗转化子,经SDS-PAGE蛋白电泳证明获得了能高效稳定分泌表达重组BGLⅠ的转化子。重组BGLⅠ酶能直接水解培养液中的纤维二糖,在84 h测得酶活最大值为0.978 u/mL。重组BGLⅠ酶最佳反应温度为60℃,最适反应pH为4.0～5.0,并且能以纤维二糖为惟一碳源发酵乙醇,发酵90 h能够用重铬酸钾氧化比色法检测到乙醇的体积分数为0.51%。结果表明:成功克隆并在酿酒酵母中表达了一种高活性的β-葡萄糖苷酶,对于工业上直接利用纤维素为惟一碳源发酵生产乙醇的研究有重要意义。
- 刘泽寰唐根云全艳彩龚映雪肖文娟王峻梅
- 关键词：绿色木霉酿酒酵母乙醇
- 绿色木霉CBHⅡ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：7
- 2009年
- 采用反转录聚合酶链式反应的方法从绿色木霉中克隆得到纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)的编码基因cbh2.将该基因片段接入酿酒酵母整合型表达载体pScIKP中,得到重组质粒pScIKPc-bh2.电转化酿酒酵母菌株,通过G418浓度梯度筛选出高抗转化子.采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测CBHⅡ蛋白的表达,并采用羧甲基纤维素糖化力法检测重组CBHⅡ的酶活.实验结果表明:该基因大小为1 416 bp,编码有472个氨基酸残基,并已将序列提交GenBank,登录号为DQ864992.SDS-PAGE分析发现重组CBHⅡ成功分泌到了胞外,其相对分子质量约为70 000.培养液中的酶活最高可达7.71U/mL,其作用的最适pH值为5.0,最适反应温度为65℃,且具有较好的热稳定性.
- 刘泽寰全艳彩唐根云龚映雪肖文娟王峻梅
- 关键词：绿色木霉编码基因酿酒酵母
