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旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析: 应用感染旋毛虫猪血清,对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行了免疫筛选,对阳性克隆pBK-CMV-WN10的序列分析结果表明,cDNA 全长为1352 bp,含有1个1218 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽...; 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂; 文献传递

旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析被引量：7: 2005年; 应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因。; 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫抑制蛋白半胱氨酸蛋白酶抗原基因分泌性肌幼虫

旋毛虫T3223-6 cDNA的表达及鉴定: 2005年; 利用PCR技术将T 3223-6 cDNA扩增克隆到原核表达载体pET-28a,将重组质粒转入克隆菌N ova-b lue,提取质粒进行酶切和测序鉴定后转入表达菌BL 21star(DE3)。用1 mM IPTG诱导培养重组表达菌,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析,检测重组蛋白的表达情况。用旋毛虫感染猪血清和正常血清,通过w estern b lotting检测重组蛋白的反应原性。结果表明:经IPTG诱导后重组转化菌的裂解产物出现44 kD左右的表达带,大小与理论值相符;w estern b lotting检测结果显示重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有反应原性。; 龙民慧付宝权刘明远孙树民郭恒卢强P.Boireau; 关键词：旋毛虫 CDNA

旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定: 2006年; 根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK-CMV-N10序列设计引物,利用PCR技术将基因N10的信号肽去除后,用T/A法克隆到pMD-18T载体,转化至大肠杆菌NovaBlue,经鉴定及序列测定,结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T-N10进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star(DE3),用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白,相对分子质量为38700,诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15%。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白,对其生物学特性初步鉴定结果表明,具有类似脱氧核糖核酸酶的活性。; 高长玲刘明远郭恒孙树民付宝权崔国祯卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫

旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达: 应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行免疫筛选,对阳性克隆WN1 序列进行生物信息学分析,结果表明,WN1 cDNA 全长为474 bp,含有一个354 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多...; 高长玲付宝权刘明远原丽红吴秀萍张亚兰李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫基因克隆; 文献传递

旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析被引量：5: 2008年; 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针，对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选，将获得的阳性克隆进行测序，用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示，阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp，含有1个1287bp的完整的开放阅读框架，编码由429个氨基酸组成的多肽，理论分子质量为47．5ku，等电点为8．45。SMART分析表明，1～18位氨基酸为信号肽序列，37～277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域，其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基，78～80位氨基酸为N-糖基化位点（NCS），另外还有6个保守的Cys形成二硫键。BLASTn同源性分析表明，与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性，为1个新的cDNA分子。BLASTp蛋白质同源性分析表明，与丝氨酸蛋白酶的同源性为30％左右。Southern—blot杂交表明，此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族，具有基因多态性。cDNA的PCR结果表明，此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达。; 李莲瑞付宝权卢强韩文瑜刘明远; 关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因克隆

旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选: 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫3日龄成虫cDNA 文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序,用分子生物学软件对所得cDNA 序列进行序列分析.结果从4×10个重组噬菌体中共获得33个阳性克隆.序列分析结果显示:...; 张亚兰付宝权刘明远原丽红吴秀萍李莲瑞卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫成虫免疫筛选; 文献传递

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中法先进研究计划项目(PRABT03-02)