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内质网应激激活与依托泊甙和放线菌素D耐药绒癌相关性研究被引量：2: 2011年; 目的探讨内质网应激激活与拓扑异构酶Ⅱα介导的依托泊甙(etoposide,VP16)和放线菌素D(actinomy-cin-D,Act-D)耐药绒癌的关系。方法采用间断诱导法诱导人绒癌细胞系JEG-3,分别建立绒癌ActD耐药细胞系JEG-3/ActDB1和VP16耐药细胞系JEG-3/VPC1。细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)观察敏感细胞和耐药细胞的生长增殖规律和耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性变化;荧光定量PCR技术分别检测两种不同药物诱导的JEG-3耐药株中拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)和内质网应激(ERS)各个通路相关的基因mR-NA的表达水平。结果 (1)成功建立了绒癌耐药细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1。其耐药指数分别为50.64±10.68和65.87±3.19。耐药株生长速度均较亲本细胞减慢,三者的染色体倍性差异无统计学意义。(2)在两种不同的耐药株中,TopoⅡα的表达水平均明显低于亲本细胞,而与ERS各个通路相关基因均有不同程度的激活。结论成功建立了针对ActD和VP16耐药的绒癌细胞系JEG-3/ActDB1和JEG-3/VPC1。内质网应激激活可能参与绒癌耐药的发生。; 韩冰向阳王铮王云张浩黄尚志; 关键词：绒癌耐药放线菌素D 依托泊甙内质网应激

绒毛膜癌氟尿苷耐药细胞系的建立及其胸苷合成酶的表达被引量：6: 2009年; 目的建立对氟尿苷（FUDR）耐药的绒毛膜癌（绒癌）细胞系，鉴定其生物学特性，并探讨胸苷合成酶（TS）在绒癌FUDR耐药细胞中的表达。方法采用间断诱导法诱导绒癌细胞系JeG-3，建立绒癌FUDR耐药细胞系JeG-3／FUDRA（诱导浓度为2．3×10^-3mol／L）。倒置显微镜观察细胞形态；活细胞计数（CCK-8）法观察敏感细胞和耐药细胞的生长和耐药指数；化学发光法测定培养液中的激素水平；流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性；荧光定量PCR技术检测不同浓度FUDR（2．3×10^-3 、5．1×10^-5、5．1×10^-7mol／L）诱导的JeG-3细胞（JeG-3／FUDRA、JeG-3／FUDRC、JeG-3／FUDRE）中TSmRNA的表达。结果（1）绒癌耐药细胞系JeG-3／FUDRA的建立及生物学鉴定：历时10个月成功建立了绒癌耐药细胞系JeG-3／FUDRA，其耐药指数为31．62。与JeG-3亲本细胞相比，JeG-3／FUDRA耐药细胞的形态发生明显改变，细胞生长明显减慢（P〈0．05），群体倍增时间明显延长[分别为（27．4±0．8）和（47．3±2．1）h，P〈0．01]；G2／M期细胞比例明显下降[分别为（27±6）％和（9±3）％，P〈0．05]，G0／G1期细胞比例明显增加[分别为（29±3）％和（63±7）％，P〈0．01]；染色体数目明显增加[分别为（76±5）和（143±5）条，P〈0．01]；其培养液中人绒毛膜促性腺激素（hCG）水平明显下降[分别为（29．1±9．9）和（8．9±0．9）mU／ml，P〈0．05]，孕酮水平明显下降[分别为（31±8）和（16±3）ng／ml，P〈0．05]。（2）耐药细胞中TS mRNA的表达：经低浓度FUDR诱导后，JeG-3／FUDRE细胞中TS mRNA的表达水平下调；随着FUDR诱导浓度的增加和作用时间的延长，细胞中TS mRNA的表达水平逐渐恢复，其中JeG-3／FUDRC细胞中TSmRNA表达水平和JeG-3亲本细胞比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；而JeG-3／FUDRA细胞中TS mRNA表达水平则明显高于JeG-3亲�; 韩冰向阳沙桂华张浩刘欣; 关键词：绒毛膜癌氟尿苷胸苷酸合酶

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国家教育部博士点基金(200800230001)

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