广东省科技计划工业攻关项目(53056)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：夏金堂徐波伍兆锋王劭晟李书华更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体表达载体的制备
- 2008年
- 目的构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体。方法首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（sTRAIL）基因的穿梭质粒腺相关病毒穿梭质粒-可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（pAAV-sTRAIL），将穿梭质粒转染入HEK293细胞（人胚肾细胞系）中，采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆rAAV-sTRAIL；PCR法鉴定阳性rAAV-sTRAIL；氯化铯密度梯度离心法纯化rAAV-sTRAIL；紫外分光光度仪测定rAAV-sTRAIL颗粒数及纯度，噬斑分析法测定rAAV-sTRAIL感染滴度；Western免疫印迹检测rAAV-sTRAIL在HEK293细胞中的表达情况。结果成功构建了rAAV-sTRAIL，制备的病毒纯度好、滴度高，且在HEK293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。结论构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL，为研究TRAIL抗肿瘤细胞效应及临床应用提供先进的载体系统。
- 蔡刁龙夏金堂朱光辉翁杰锋
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
- 超声微泡造影剂增强重组腺相关病毒rAAV—sTRAIL感染肝癌细胞的实验观察被引量：1
- 2008年
- 目的探讨携带可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）基因的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，以及采用超声辐照联合微泡造影剂介导rAAV-sTRAIL转染肝癌细胞的有效性。方法单纯重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染肝癌细胞株HepG2，以及利用超声辐照联合微泡造影剂介导重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL感染HepG2细胞，分别以RT-PCR方法和Westen印迹法检测细胞内sTRAIL基因mRNA及蛋白表达量，噻唑蓝法检测细胞的增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL可有效转染HepG2细胞，sTRAIL mRNA表达水平在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可抑制HepG2细胞增殖，其抑制率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）；rAAV-sTRAIL可诱导HepG2细胞凋亡，其凋亡率在微泡造影剂组高于单纯病毒组，二者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL在肝癌细胞中能有效表达，sTRAIL基因对肝癌细胞有明显的抑制增殖和促凋亡作用；联合超声微泡造影剂及低强度超声，可有效提高腺相关病毒载体在肝癌细胞中的感染率，从而增强sTRAIL对肝癌细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。
- 夏金堂徐波王劭晟赖越元伍兆锋李书华李雯
- 关键词：超声微泡造影剂
- 携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体重组腺相关病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的:构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因的重组腺相关病毒(recombined adeo-associated virus,rAAV)载体。方法:实验于2005-09/2006-04在中山大学附属第一医院普通外科实验室完成。首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,利用磷酸钙共沉淀法将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒;聚合酶链反应法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况。结果:成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。结论:构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为组织工程相关细胞转基因构建及临床应用提供先进的载体系统。
- 夏金堂徐波李雯王劭晟赖越元伍兆锋李书华
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
- 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体表达载体的构建
- 2007年
- [目的]构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒载体。[方法]首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒pAAV-sTRAIL,将穿梭质粒共转染入HEK293细胞中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒rAAV-sTRAIL。以噬斑分析法筛选单克隆重组腺相关病毒:PCR法鉴定阳性重组腺相关病毒;氯化铯密度梯度离心法纯化病毒;紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,噬斑分析法测定病毒感染滴度;Western blot检测rAAV-sTRAIL在293细胞中的表达情况。[结果]成功构建了重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL。[结论]构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为研究TRAIL抗肿瘤细胞效应及临床应用提供先进的载体系统。
- 王劭晟徐波夏金堂伍兆锋何绮微
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
