国家教育部博士点基金(20060542006)
- 作品数：19 被引量：65H指数：4
- 相关作者：夏立秋丁学知孙运军张友明孙星明更多>>
- 相关机构：湖南师范大学湖南大学华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学自动化与计算机技术理学更多>>
- 一种鲁棒文本水印的算法研究被引量：2
- 2006年
- 文本水印是一种有效的数字文本版权保护技术,鲁棒性和安全性是其研究的核心问题之一。基于单词间字符统计特征的文本水印(简称TWSCIWC)是一种同时基于内容和格式的文本数字水印算法,具有一定的鲁棒性。本文提出了TWSCIWC的改进算法,引入了冗余嵌入思想和非对称加密签名技术,讨论和分析了这一算法较好的水印性能。
- 胡晶晶孙星明
- 关键词：文本水印鲁棒性安全性
- 喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响被引量：1
- 2009年
- 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护.
- 袁灿夏立秋丁学知田野尹佳
- 关键词：苏云金芽胞杆菌棉铃虫CRY1AC类胰蛋白酶
- 一种带有动态群管理员的群签名方案被引量：1
- 2008年
- 提出了一种带有动态数量群管理员的群签名方案,解决了在开放网络环境某些应用中,群管理员不能完全信任的问题。该方案签名长度比较短,并满足群签名的安全要求和形式化定义,且符合子群签名的定义,具有良好的应用前景。
- 吴勇孙星明罗纲李雯
- 关键词：群签名双线性映射形式化定义
- 高效液相色谱法测定刺糖多胞菌发酵液多杀菌素含量被引量：6
- 2008年
- 为了建立刺糖多胞菌（Saccharopolyspora spinosa）发酵液中多杀菌素不同组分的分离与定量分析的高效液相色谱检测方法.以AQ12S05-1546WT（150×4.6 mmL.D.S-5μm,12 nm）为分析柱,以甲醇-乙腈-2%醋酸铵溶液（45∶45∶10,v/v/v）为流动相,流速1.5 mL/min,检测波长250 nm.结果表明多杀菌素在25-1000 mg/L范围内线性关系良好,本方法标准偏差为1.486 9,变异系数为0.79%,相关系数为0.9992,平均回收率为99.58%.多杀菌素化合物A,B,C,D,E,F的保留时间分别为7.01,3.59,3.21,8.33,5.72,4.81 min.本方法能准确测定刺糖多胞菌发酵液中多杀菌素含量,有效分离多杀菌素不同组分.
- 易勇夏立秋丁学知杨尉王海龙罗玉双
- 关键词：刺糖多孢菌高效液相色谱法多杀菌素
- 苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析
- 2008年
- 免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A,InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOFMS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前己开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA.InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.
- 李小辉夏立秋袁灿丁学知尹佳
- 关键词：苏云金芽胞杆菌INHA双向电泳
- 外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达被引量：10
- 2008年
- 【目的】研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)工程菌的方法。在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力。而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失。将基因整合入染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法。【方法】本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12。并利用pKTF12质粒将cry1Ac基因定点整合入XBU001染色体上。【结果】利用载体pKTF12将cry1Ac定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响。重组菌株KCTF12中的cry1Ac基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体。与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势。【结论】定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法。
- 刘萍夏立秋胡胜标严礼丁学知张友明喻子牛
- 关键词：苏云金芽孢杆菌同源重组CRY1AC基因
- DNA改组的最新动态及应用前景被引量：4
- 2009年
- DNA改组(DNA shuffling)是目前最方便、有效的一种分子水平的体外定向进化技术,该技术同倾向错误PCR(Error-prone PCR)相结合,通过对单基因或相关基因家族的靶序列进行多轮随机诱变、重组和高通量的筛选,可以有效富集正突变,去除负突变,提高突变文库的丰度,创造新基因和获得期望功能的蛋白质。DNA改组技术已在新药物等领域取得了广泛的应用,极大地推动了现代生物科学和生物技术的发展。该技术同计算机强大的数据分析系统相结合,将会为后基因组学的发展提供强有力的技术平台。
- 单世平夏立秋丁学知刘石泉张友明
- 关键词：DNA改组基因家族后基因组学
- 发光杆菌碳端截短的Mcf毒素杀虫活性研究
- 2009年
- 发光杆菌能产生很多毒素杀死昆虫宿主.这些毒素中有一种叫Mcf致软因子,可以在大肠杆菌中表达并毒杀毛虫.通过同源性比对分析,在Mcf氨基酸序列中N端有一个BH3的区域,拥有BH3结构域的蛋白具有细胞凋亡的功能,推测保留N端BH3结构域的碳端截短Mcf毒素具有杀虫毒力.从发光杆菌属(Photorhabdus luminescens subsp.laumondii)中克隆了杀虫毒素基因mcf的5′端3960bp的核酸序列(包含BH3结构域),将该基因连接到E.coli表达载体pET28a上,并转入BL21(DE3).经IPTG诱导后,在SDS-PAGE上发现145kD的目的蛋白条带.利用亲和层析纯化得到纯毒素,分别对甜菜夜蛾一龄幼虫喂食生测和对甜菜夜蛾四龄幼虫(Spodoptera exigua)注射生测,显示该毒素具有喂食毒力和血腔毒力,证明含有BH3区域的碳端截短Mcf毒素有杀虫的生物活性.
- 谭思维丁学知夏立秋吴峰孙运军张友明
- 关键词：发光杆菌甜菜夜蛾
- 聚酮化合物β-酮酰-ACP合酶的计算机对比分析与组合生物合成
- 2010年
- 为了合理地设计新的聚酮化合物提高组合生物合成的效率,本文使用ClustalW、Mega4.0分析了26种来自不同聚酮合酶的β-酮酰-ACP合酶结构域的序列特征,并用ProtParam、Phdsec、Swiss-Model等工具对其中9种具有不同底物专一性的β-酮酰-ACP合酶的一级结构、二级结构和三级结构及活性位点进行了分析与预测。发现它们结构上的相似性大于序列上的相似性;活性位点都富含丝氨酸;底物含有2个羧酸基团的β-酮酰-ACP合酶的理论pI均小于5.0且其形式电荷总量也偏低;序列V303ELHGTGTPLGDPIEAGA320是这26种β-酮酰-ACP合酶的一段保守序列,但它并不与活性位点相邻。这些研究对进行聚酮合酶的模块或结构域替换以及定点突变具有重要的指导意义,也为探讨其的进化机制提供了参考。
- 唐滢夏立秋王海龙胡胜标余子全孙运军
- 关键词：组合生物合成底物专一性
- W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性被引量：2
- 2008年
- W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9 h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值.
- 王发祥夏立秋丁学知赵新民单世平莫湘涛张友明喻子牛
- 关键词：定点突变色氨酸苯丙氨酸稳定性
