国家自然科学基金(39730420)
- 作品数：25 被引量：136H指数：7
- 相关作者：曹雪涛张明徽于益芝张立煌姚航平更多>>
- 相关机构：第二军医大学浙江大学浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞对特异性CTL的体内外诱导作用被引量：4
- 1999年
- 目的 探讨白细胞介素-12(IL-12)诱导小鼠红白血病细胞产生的树突状细胞,对白血病特异性CTL细胞的诱导作用,及体内免疫后对抗肿瘤免疫应答的诱导效果.方法:采用4/小时^(51)Cr释放法,检测CTL杀伤活性;观察小鼠红白血病细胞来源的树突状细胞体内免疫冶疗后对肿瘤的抑制作用,采用了HE染色和电镜等技术,分析肿瘤组织的病理学变化.结果:IL-12诱导FBL-3细胞产生的DC,在体外可诱导出FBL-3细胞特异性的CTL.采用IL-12诱导FBL-3细胞产生的DC免疫C57 BL/6小鼠.体内诱导出的CTL杀伤活性明显高于对照组.实验组小鼠能够有效的抵抗野生型FBL-3细胞的再攻击;肿瘤生长受到明显的抑制,组织学观察显示,肿瘤局部有较多炎性细胞浸润和细胞坏死;透射电镜可观察到典型的凋亡征象,结论:IL-12诱导小鼠FBL-3红白血病细胞产生的树突状细胞,在体内外可诱导出FBL-3细胞特异性的CTL,体内免疫后可增强抗肿瘤免疫应答,该结果为白血病的免疫治疗提供了新的途径.
- 赵勇张明徽曹雪涛
- 关键词：红白血病树突状细胞细胞毒性T细胞
- 气管内应用IL-18重组腺病毒对实验性肺转移癌的治疗作用被引量：1
- 2000年
- 目的 :研究气管内应用白细胞介素 18(IL - 18)重组腺病毒 (Ad IL - 18)对实验性肺转移癌的治疗作用。方法 :(1)小鼠气管内滴入 Ad IL - 18后 ,以 RT- PCR法检测小鼠肺组织中 IL - 18m RNA表达 ,EL ISA法测定局部及外周血 IL - 18及其相关因子的水平。 (2 ) C5 7BL / 6小鼠尾静脉注射 L ewis肺癌 3L L细胞以建立肺转移癌模型 ,观察气管内应用 Ad IL - 18对实验性肺转移癌的治疗作用 ,包括肺转移结节数、动物存活期、存活率变化等 ,并比较自然杀伤 (NK )细胞和细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )活性。 结果 :(1)气管内应用 Ad IL - 18后 6 h,小鼠肺内即可检测到 IL - 18m RNA表达 ;72 h后肺灌洗液中可测到 IL - 18,且高于外周血水平 ,而对照组肺灌洗液及外周血中均未检测到。 (2 )气管内滴入 Ad IL - 18对实验性肺转移癌有治疗作用 ,可使肺转移结节减少、动物的存活期延长及存活率升高 ,同时对 NK细胞、CTL 活性有增强作用。 结论 :气管内应用 IL- 18重组腺病毒后可有效表达 ,并对实验性肺转移癌有治疗作用。
- 陈吉泉曹雪涛修清玉于益芝罗文侗
- 关键词：基因治疗IL-18
- 慢性丙型肝炎患者血清sFas和sICAM-1及IL-18水平与意义被引量：7
- 2002年
- 目的 :观察可溶性 Fas(s Fas)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)及白细胞介素 - 18(IL- 18)在慢性丙型肝炎患者血清中的水平 ,探讨它们在丙型肝炎发病机制中的作用。方法 :采用 EL ISA法检测 30例慢性丙型肝炎患者 α-干扰素治疗前后血清 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平 ,荧光定量 PCR技术测定血清 HCV- RNA滴度。结果 :慢性丙型肝炎患者 s Fas、s ICAM- 1、IL- 18的水平均显著高于正常人 (P<0 .0 1) ,且与血清 HCV- RNA滴度密切相关(分别为 r=0 .915 ,r=0 .795 ,r=0 .75 7,P均 <0 .0 1) ;s ICAM- 1、IL- 18水平与 ALT活性显著相关 (分别为 r=0 .95 2 ,r=0 .96 9,P<0 .0 1) ,但 s Fas水平与 ALT无关 (P>0 .0 5 )。实验结果还显示 ,抗病毒治疗有效者 ,血清s Fas、s ICAM- 1、IL- 18较治疗前明显下降 ,而无反应者治疗前后改变不明显。结论 :s Fas、s ICAM- 1、IL- 18均参与慢性丙型肝炎免疫致病过程 ,且与肝脏炎症活动性。
- 姚航平夏大静张立煌刘克洲
- 关键词：可溶性FASSFASSICAM-1可溶性细胞间粘附分子-1
- 弱酸洗脱提取的肿瘤抗原肽致敏的树突状细胞对CTL的体内外激活效应被引量：20
- 2000年
- 目的 弱酸洗脱提取小鼠红白血病细胞膜表面肿瘤抗原肽 ,用于致敏树突状细胞(dendriticcells,DC) ,观察其对细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的体内外激活效应。方法 以pH3 3的枸橼酸 磷酸盐缓冲液室温下处理FBL 3小鼠红白血病细胞 5min,流式细胞术检测洗脱效率 ;弱酸洗脱的抗原肽经SepPakC18柱提取纯化 ,用于致敏DC ,检测其体外刺激CTL细胞株增殖的能力及体内激发特异性抗肿瘤免疫应答的能力。结果 弱酸可以洗脱肿瘤细胞膜表面绝大部分与MHCⅠ类分子结合的抗原肽 ;经此抗原肽致敏的DC ,体外可以激发特异性识别FBL 3细胞抗原九肽CCLCLTVFL的CD8+CTL细胞株增殖 ,回输小鼠 ,可以诱导体内生成高水平的特异性CTL活性 ,使小鼠获得抵抗后继FBL 3细胞攻击的免疫保护能力 ,并显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DC回输组。结论 弱酸可以有效洗脱肿瘤细胞表面的Ⅰ类抗原肽 ,该类多肽致敏的DC ,在体内外均可激活CTL 。
- 朱学军曹雪涛雷虹于益芝王建莉章卫平马施华
- 关键词：肿瘤抗原树突状细胞CTL
- 克隆、表达及测序一体化的原核表达载体pLCM182的构建及在细胞因子表达中的应用被引量：1
- 2000年
- 目的 构建利于PCR产物克隆、表达、测序一体化的载体。方法 构建载体并以酶切鉴定 ,该载体以强启动子pL及终止子rrnBT1T2 控制外源基因转录及终止 ,以T7噬菌体基因 10的RBS序列来提高目的基因的翻译水平 ,同时在目的基因的上下游引入测序引物序列以便于直接进行序列测定 ,从而减少克隆步骤 ,降低在多次克隆过程中碱基发生错误的机率。对多克隆位点改造 ,使表达外源基因时能对其翻译起始序列进行自由的设计。结果 构建并鉴定了pLCM182。利用该载体成功地表达了hIL 4、hIL 17及hIL 1RA及hIFN β等数种细胞因子基因 ,表达量均高于报道水平。结论 该载体的构建极大地方便了基因克隆。
- 赵忠良黄欣陈苏民曹雪涛
- 关键词：大肠杆菌细胞因子
- 胃癌组织中树突状细胞浸润及其表面分子表达的临床意义被引量：24
- 2002年
- 目的 :研究胃癌组织中树突状细胞 ( dendritic cells,DC)浸润及其表面分子表达的临床意义。方法 :采用酶消化胃癌组织 ,分离细胞后进行免疫组化 S- 10 0染色和流式细胞术分析 ,研究 15例胃癌组织中 DC的浸润及其表面分子表达与胃癌病理分期的关系 ,并通过 RT- PCR技术分析了 IL - 10、VEGF和 TGF-β1 等免疫抑制因子在胃癌细胞中的表达。 结果 :胃癌组织中 DC的数量少 ,而且其表面分子如 MHC 类分子、共刺激分子 B7- 1和粘附分子 ICAM- 1等呈低表达或不表达 ,DC的数量及其表面分子的表达与胃癌的病理分期负相关。免疫抑制因子 IL- 10、VEGF和 TGF- β1 在胃癌细胞中有高水平的表达。 结论 :提示胃癌组织中
- 王正昕张明徽李楠王元和王强曹雪涛
- 关键词：树突细胞肿瘤分期膜蛋白质类肿瘤浸润
- 肿瘤抗原多肽致敏白细胞介素18基因修饰的树突状细胞治疗小鼠转移性肺癌被引量：14
- 2001年
- 目的 探讨肿瘤多肽致敏的白细胞介素 18(IL 18)基因修饰的树突状细胞 (DC)对自发性肺转移癌的治疗作用。方法 小鼠足垫注射 3LLLewis肺癌细胞建立自发性肺转移癌模型 ,经骨髓来源的IL 18基因修饰、3LL特异抗原多肽Mut1体外致敏DC(DC IL 18/Mut1)皮下免疫 2次 ,观察荷瘤鼠肺脏重量、肺表面转移结节、存活期的变化及相应免疫指标等变化 ,实验分 8组 ,组间差异行t检验 ,生存期行时序检验。结果 与对照病毒组 (DC LacZ/Mut1)及未处理DC组相比 ,DC IL 18/Mut1组肺脏重量最轻 (2 15mg± 2 0mg与 398mg± 2 3mg和 987mg± 45mg比较 ,t值分别为 14.7及 38.4,P均<0 0 1)、肺表面转移结节最少 (0与 7.8± 2 .7和 49.4± 4.3比较 ,t值分别为 7.0 7及 16 .2 ,P均 <0 0 1)、存活期最长 (χ2 分别为 6 .78、10 .49,P均 <0 .0 1) ,其诱导细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)活性 (5 3.4± 3.1与 41.3± 2 .6和 9.8± 2 .1比较 ,t值分别为 7.3及 2 8.5 ,P均 <0 .0 1)和天然杀伤细胞 (NK)活性 (35 .8± 2 .4与 15 .6± 2 .8及 13.6± 2 .5比较 ,t值分别为 13.4及 15 .7,P均 <0 .0 1)最显著 ,且CD4+ T、CD8+ T及NK细胞比例增加。结论 MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽致敏的IL 18基因修饰的DC能通过诱导显著的抗肿瘤免疫反应而对自发?
- 陈吉泉曹雪涛修清玉何龙于益芝罗文侗
- 关键词：白细胞介素18树突细胞基因疗法转移性肺癌
- 重组人白细胞介素17的原核表达、纯化及鉴定被引量：2
- 1999年
- 目的:优化重组人白细胞介素17的原核表达条件,选择不同的路线进行分离纯化.方法:利用SDS-PAGE方法分析比较重组人白细胞介素17在不同培养基、不同诱导时间的表达量,选择最适条件,大量扩增后,分离出包涵体,分别采用盐酸胍溶解法和SDS溶解法两条纯化路线进行进一步的分离和纯化,并对所纯化产物进行常规分析鉴定.结果:采用上述两种不同的溶解包涵体方法,通过后续复性及纯化,均可得到高纯度具有生物学活性的重组IL-17.采用SDS溶解法具有较高的得率,采用盐酸胍溶解法纯化得率较低,得产物的生物学活性较高.结论:通过表达及纯化,得到了大量高纯度具有活性的rhIL-17,为进一步研究IL-17的体内外生物学效应打下了基础.
- 王永红陈国友曹雪涛胡晋红原永芳苏晴
- 关键词：原核表达纯化IL-17
- 低剂量环磷酰胺增强MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏的树突状细胞的抗肿瘤转移效果被引量：1
- 1999年
- 目的:研究低剂量环磷酸胺(Cy)联合MHC Ⅰ类限制性肿瘤抗原多肽Mutl致敏、白细胞介素2(IL-2)基因修饰的树突状细胞(DCs)对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理.方法:制备小鼠骨髓来源的DCs,用转移性Lewis肺癌特异性多肽Mutl预激经IL-2基因修饰的DCs联合低剂量Cy治疗转移性肺癌小鼠.通过FACS分析其脾细胞内T淋巴细胞比例的变化,~51Cr释放法检测CTL和NK细胞杀伤活性.结果:肿瘤抗原多肽致敏、IL-2基因修饰的DCs与小剂量Cy联合后,能比单用DCs更有效地治疗转移性肺癌,小鼠脾细胞中CD8^+T细胞和NK1.1^+细胞明显比例升高,联合治疗组诱导出的CTL杀伤活性最高.结论:以肿瘤抗原多肽冲击致敏的IL-2基因修饰的DCs联合小剂量Cy能更有效地促进荷瘤宿主免疫应答,具有显著地体内抑制肺癌转移的效果.
- 孙黎飞曹雪涛张明徽章卫平黄欣田野苹于益芝
- 关键词：树突状细胞环磷酰胺基因疗法
- MHCI类抗原多肽致敏IL-2基因修饰的树突状细胞对小鼠引流淋巴结T细胞亚群的影响及其免疫保护作用被引量：7
- 2001年
- 目的 :探讨MHCI类分子限制性肿瘤抗原多肽Mutl体外冲击白细胞介素 2 (Interleukin 2 ,IL 2 )基因修饰的树突状细胞 (Dendrticcells,DC)对小鼠体内特异性免疫的活化机制。方法 :用腺病毒作为载体介导小鼠IL 2基因修饰DC ,用小鼠Lewis肺癌 3LL细胞株MHCI类分子限制性八肽Mutl冲击IL 2基因修饰的DC(DC IL 2 Mutl)免疫小鼠 ,用流式细胞术 (FACS)分析免疫保护小鼠接受 3LL细胞再攻击后引流淋巴结内T细胞亚群的比例变化。结果 :用Mutl冲击的DC免疫的小鼠抵抗3LL细胞再攻击时 ,引流淋巴结内CD8+ T淋巴细胞比例明显升高 ,DC IL 2 Mutl免疫保护的小鼠接受 3LL细胞再攻击后引流淋巴结内CD8+ 和NK细胞的比例都明显升高。结论 :研究表明MHCI类分子限制性肿瘤抗原多肽体外冲击IL 2基因修饰的DC免疫小鼠 ,能诱导小鼠产生特异性抗肿瘤免疫应答 。
- 孙黎飞曹雪涛刘海军
- 关键词：树突状细胞基因修饰T细胞亚群小鼠
