山东省自然科学基金(Y2007D47)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆、鉴定及原核表达被引量：1
- 2009年
- 补体C3d是补体系统(Complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。利用RT-PCR技术从鸭肝脏总RNA中扩增出C3d cDNA,克隆测序证实所得为C3d基因。然后将其连接至表达载体PGEX-6P-1,转化入E.coliBL21并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到高效表达,W estern-b lotting进一步证实目的蛋白为C3d。本研究可为开发利用鸭C3d奠定基础。
- 裴宗飞马雪云马耀华牛钟相
- 关键词：原核表达
- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
- 补体C3是补体激活的经典途径、替代途径以及甘露聚糖结合凝集素途径三者的交汇点,是宿主防御机制中占据核心地位的一个特殊分子。而补体C3d是补体C3不可再被酶解的最小片段,是连接固有免疫和特异性免疫的桥梁,具有多种生物学效应...
- 裴宗飞牛钟相
- 文献传递
- 猪、鼠、鸭补体C3d基因克隆与序列分析被引量：1
- 2011年
- 为了比较猪、鼠、鸭C3d基因的不同,以便为下一步研究不同动物C3d作为分子佐剂核酸疫苗的效果,试验对3种基因进行克隆和序列分析。首先提取猪、鼠、鸭的肝脏总RNA,以RNA为模板,通过RT-PCR方法,分别扩增C3d分子的cDNA,再将3种动物的cDNA分别克隆到pMDl8-T载体中,然后转化BL21大肠杆菌,经酶切鉴定后进行序列测定,根据测序结果利用生物信息学工具软件对3种C3d进行生物学性质分析。结果发现,猪与鼠和鸭的C3d基因的同源性分别为81.9%和65.6%,鼠与鸭C3d基因的同源性为65.8%;鼠、猪的补体C3d分子与受体CR2结合的功能区有28个氨基酸,鸭有29个氨基酸。
- 夏庆祥张德庆吴家强王小龙牛钟相
- 关键词：C3DRT-PCR克隆
- 猪C3d分子佐剂PRRSV GP5基因核酸疫苗的构建及免疫效果的研究被引量：3
- 2011年
- 【目的】构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因C3d-P28分子佐剂重组质粒,探明C3d-P28分子佐剂的免疫增强效果。【方法】用大肠杆菌疫苗对健康猪进行免疫激活,提取猪肝脏总RNA,RT-PCR克隆C3d-P28并连接至pUC19载体,构建pUC19-P28.n(2、4、6)串联体,然后分别将P28.n(2、4、6)连接至真核表达载体pcDNA3.1构建成pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)。RT-PCR扩增PRRSV GP5基因,分别定向克隆至pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建pcDNA3.1-GP5-P28.n(2、4、6)重组质粒;提取重组质粒进行双酶切、电泳,同时用重组质粒转染Marc 145细胞,经间接免疫荧光进行蛋白表达检测,并用重组质粒免疫小鼠,通过ELISA试剂盒检测小鼠体内抗体、IL-4和IFN-γ的水平,检验重组质粒的免疫效果。【结果】从猪肝脏中克隆了C3d cDNA,构建了pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)串联体,并将PRRSV GP5基因定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-P28.n(2、4、6)中,构建了PRRSV GP5重组质粒(pcDNA3.1-GP5-P28.2、pcDNA3.1-GP5-P28.4、pcDNA3.1-GP5-P28.6);通过检测小鼠血清中抗体、IL-4和IFN-γ的结果显示,抗体效价、IL-4和IFN-γ含量均比对照组高,且以pcDNA3.1-GP5-P28.6组的效果最好,与空白对照及PCDNA3.1-GP5组比较差异均显著(P<0.05)。【结论】构建了猪补体C3d-P28分子佐剂PRRSV GP5重组质粒,该质粒可刺激机体产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,补体C3d-P28分子佐剂能显著增强PRRSV GP5基因的免疫效果。
- 夏庆祥张德庆吴家强牛星王小龙牛钟相
- 关键词：PRRSV免疫效果
- 新城疫病毒山东分离株ShD-5-06F和HN基因序列分析被引量：1
- 2008年
- 从山东济南某非典型新城疫发病鸡群中分离到一株新城疫病毒株（ShD-5—06），研究其生物学特性表明，该病毒具有新城疫强毒株的一些特征。从该分离株扩增出其F和HN基因，并与标准株进行同源性比较，为探讨NDV是否发生变异提供理论依据。本试验通过RT—PCR法特异性地扩增出F和HN基因全基因序列，并对其与已经发表的序列进行核苷酸序列测定和分析。结果表明，ShD-5—06株的F和HN基因开放性阅读框架（ORF）为1662bp和1716bp，分别编码489个和571个氨基酸。与国外发表的部分新城疫病毒强毒株和弱毒株之间相应序列进行比较，F基因核苷酸序列的同源性在84．1％～88．7％之间，氨基酸同源性在88．1％～93．3％之间；HN基因核苷酸序列的同源性在82．19，5～87．4％之间，氨基酸同源性在88．6％～90．9%之间；F蛋白裂解位点区（112～117）氨基酸组成与强毒株一致，说明NDV山东分离株（ShD-5—06）为新城疫强毒株。
- 岳楚昕莫贞峰李颖刘栋朱剑英
- 关键词：新城疫病毒生物学特性F基因HN基因
- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
- 提取鸭肝细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出补体C3d基因的cDNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。结果显示与已发表的各种哺乳...
- 裴宗飞张文娟牛钟相
- 关键词：RT-PCR
- 文献传递
