目的探讨高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、caspase-3表达的影响,进一步探讨其加重脑缺血损伤的作用机制。方法将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:高血糖组、正常血糖组和假手术组。按体质量4g/kg给予大鼠尾静脉注射25%(质量浓度)的葡萄糖,造成大鼠高血糖状态;继而制作大脑中动脉阻塞脑缺血再灌注模型。于缺血2h再灌注24h进行神经功能评分,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(terminal-deoxy-nucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测大鼠脑组织细胞凋亡数,采用免疫组化染色检测大鼠脑组织caspase-9和caspase-3表达。结果 (1)高血糖组神经功能评分为(4.20±0.63)分,正常血糖组为(3.50±0.70)分,假手术组为0分。高血糖组及正常血糖组的神经功能评分较假手术组均显著增加(P<0.05),且高血糖组神经功能评分较正常血糖组增加(P<0.05)。(2)高血糖组凋亡细胞数为(16.30±3.30)个,正常血糖组为(14.60±3.27)个,假手术组为(0.50±0.53)个。高血糖组及正常血糖组的凋亡细胞数较假手术组增多(P<0.05),且高血糖组细胞凋亡数较正常血糖组增多(P<0.05)。(3)高血糖组caspase-9和caspase-3灰度值分别为114.30±3.83、111.50±3.17,正常血糖组分别为117.20±4.34、117.40±3.24,假手术组分别为146.20±1.98、146.80±0.74。高血糖组及正常血糖组的caspase-9和caspase-3表达水平较假手术组均增强(P<0.05),且高血糖组caspase-9和caspase-3表达水平较正常血糖组增强(P<0.05)。结论高血糖可增加缺血再灌注后脑神经细胞凋亡;caspase-9、caspase-3的激活及表达增强可能是高血糖加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。
目的探讨高血糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及对葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为三组:高血糖组、正常血糖组和假手术组。尾静脉注射25%(质量浓度)葡萄糖造成大鼠高血糖状态,制作大鼠高血糖模型,然后应用栓线法建立局灶性脑缺血再灌注模型。于缺血2 h再灌注24 h进行神经功能评分,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测大鼠脑组织细胞凋亡数,Western-blot法检测GRP78的表达量。结果(1)高血糖组神经功能评分为(3.61±0.36)分,显著高于正常血糖组的(2.78±0.36)分,两组均显著高于假手术组的0分,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)高血糖组凋亡细胞数为(27.57±4.47)个,显著高于正常血糖组的(19.51±5.13)个,两组均显著高于假手术组的(1.55±0.83)个,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)高血糖组GRP78表达水平为(0.156±0.032),正常血糖组为(0.167±0.030),假手术组为(0.064±0.004)。高血糖组GRP78表达明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05),但低于同时间点正常血糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高血糖可加剧脑缺血再灌注损伤,其作用机制可能与其促进脑神经细胞凋亡和下调GRP78有关。
