国家自然科学基金(30701012)
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 相关作者：周圆范冬梅杨铭熊冬生杨纯正更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院天津市口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人生存素survivin的克隆与分泌表达
- 2012年
- 旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达。结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体。融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。
- 代晓华姜琳琳程昕纪庆朱惠芳熊冬生周圆
- 关键词：生物医学工程生存素分泌表达大肠杆菌凋亡
- 阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响。方法采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3／抗P—gp微型双功能抗体，用阿糖胞苷刺激K562和K562／A02细胞，并用流式细胞术检测K562和K562／A02细胞B7—1、B7—2分子的表达，用CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤K562／A02细胞的影响。结果经阿糖胞苷刺激的K562和K562／A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较未刺激的对照组明显升高。阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞在效靶比0．39：1～25：1范围内，激活T细胞对耐药白血病细胞的杀伤率为（16．44±1．20）％～（60．49±2．90）％，其杀伤率与效靶比和抗体浓度呈依赖关系（P〈0．05）。结论阿糖胞苷可明显提高抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的人T淋巴细胞对高表达P—gp抗原的耐药白血病细胞的杀伤效府。
- 杨铭范冬梅高瀛岱周圆纪庆邵晓枫王金宏许元富熊冬生杨纯正
- 关键词：阿糖胞苷T淋巴细胞B7分子
- 人黑色素瘤细胞裸鼠肺转移模型的建立被引量：5
- 2009年
- 目的建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型。方法通过将不同数目的M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节。通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异。结果M21细胞1×106、2×106、5×106尾静脉接种裸鼠,均能形成肺转移灶,癌结节数目均值分别为:84±8、70±6、88±12,三组之间没有明显差异,阴性对照组未形成转移灶。M21肺转移灶细胞与亲代细胞相比,增殖增快,MMP-2活性增高,整合素αv和β3mRNA表达水平明显增高。结论M21细胞1×106经尾静脉接种裸鼠50d内即可100%成瘤。M21肺转移灶细胞具有更快的增殖能力,整合素αvβ3和MMP-2表达水平明显增高。本实验建立了稳定的肺转移模型,为黑色素瘤和整合素αvβ3的研究提供重要的动物模型。
- 张永慈周圆杨铭范冬梅熊冬生杨纯正
- 关键词：黑色素瘤肺转移整合素ΑVΒ3
- 阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤被引量：2
- 2009年
- 目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响。CytoTox96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响。结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39:1～25:1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显。结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用。
- 杨铭范冬梅高瀛岱赵英新周圆许元富纪庆王金宏熊冬生杨纯正
- 关键词：阿糖胞苷白血病细胞B7-1B7-2
- Survivin小分子抑制剂的计算机虚拟筛选及初步活性研究
- 2013年
- 目的通过计算机虚拟筛选,寻找生存素(survivin)的小分子抑制剂,并对其活性进行初步研究。方法基于sur-vivin与其抑制性配体Smac/Diablo复合物的三维结构,用分子对接的方法对含有149,214个小分子的三维结构数据库进行筛选。通过初步活性测定确定活性较高的化合物,进一步研究其对凋亡,细胞周期及活性氧产生的影响。利用分子图像学方法分析化合物与survivin之间的作用模式。结果通过能量打分并根据结构多样性和类药性原则,最终选择了35个化合物进行初步活性测定,其中有9个化合物显示出明显的抑制活性,3个化合物的半数抑制浓度在30μmol.L-1以下。选择其中活性最高的化合物1-19进行进一步研究,结果显示小剂量的1-19能够促进细胞的早期凋亡,诱导细胞内活性氧产生,导致细胞发生S和G2/M期阻滞。分子图像学分析显示活性最高的1-19能够与survivin配体结合区的71位天门冬氨酸形成两个稳定的氢键。结论通过计算机辅助药物设计、药理活性测试以及分子图像学分析,初步确定了一个针对survivin的全新的先导化合物,为今后survivin小分子抑制剂的研究奠定了基础。
- 张孝云纪庆代晓华姜琳琳熊冬生周圆
- 关键词：生存素小分子抑制剂药物设计先导化合物
- 人Survivin蛋白克隆、原核分泌表达与纯化
- <正>目的 Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成员,具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双重功能。其具有高度的保守性和细胞周期特异性表达,有助于突变的细胞逃离G_2/M检查点而达到无限增殖,从而促进肿瘤的发生。另有研究...
- 代晓华朱惠芳熊冬生周圆
- 文献传递
- 阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达
- 2009年
- 目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化。结果经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌。IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量最高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量最高。结论Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞。B7在T细胞活化中起着重要作用。
- 杨铭赵英新范冬梅周圆廖晓龙杨纯正
- 关键词：B7基因T细胞细胞因子
- 钙调素拮抗剂EBB抑制ES-2细胞转移作用机制初探被引量：2
- 2010年
- 目的研究钙调素拮抗剂EBB-O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺体外对人卵巢癌ES-2细胞的转移抑制作用及其机制。方法采用MTT法测定EBB对ES-2细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法分析细胞侵袭能力,细胞损伤实验检测细胞迁移能力;共聚焦显微镜技术检测细胞内[Ca2+]i变化。结果EBB对ES-2细胞具有增殖抑制作用,IC50为(13.67±1.56)μmol.L-1,EBB使ES-2细胞的侵袭迁移能力明显下降(P<0.01),伴随[Ca2+]i呈时间及剂量依赖性增高。结论钙调素拮抗剂EBB可抑制ES-2细胞增殖,降低ES-2细胞的侵袭转移能力,与细胞内游离钙离子浓度增高相关。
- 黄蕊姜琳琳孙晓明周圆程昕杨铭许元富熊冬生王彩云杨纯正潘兵朱惠芳
- 关键词：钙调素拮抗剂肿瘤转移钙离子肿瘤细胞迁移
- 阿糖胞苷增强急性白血病细胞B7分子表达及激活T细胞的免疫反应
- 2009年
- 目的 探讨阿糖胞苷（Ara-C）对急性白血病（AL）细胞B7分子表达和激活T细胞的免疫反应。方法 用流式细胞术检测原代AL细胞B7分子的表达。同时检测Ara-C诱导HL-60细胞 B7分子的表达，进而用RT-PCR方法检测HL-60细胞B7 mRNA表达。MTT法检测诱导后HL-60细胞对人外周血单个核细胞（PBMC）的促增生作用，并用RT-PCR法测定γ-干扰素（IFN-γ）含量。结果 40例AL患者中B7-1阳性1例，B7-2阳性3例、弱阳性4例。Ara-C能显著刺激HL-60细胞 B7表达，诱导后的HL-60细胞显著刺激PBMC增生并产生IFN-γ。结论 原代AL细胞低表达B7-1和B7-2分子。在体外，Ara-C通过诱导HL-60细胞表达B7分子，刺激T淋巴细胞增生，使PBMC分泌IFN-γ增多，显著提高了白血病细胞的免疫原性。
- 赵英新王玫周征翟文静周圆韩明哲
- 关键词：阿糖胞苷共刺激分子免疫性
- B7在血液病细胞系中的表达及对T淋巴细胞的免疫反应被引量：2
- 2009年
- 目的探讨B7共刺激分子在人类恶性血液病细胞系中的表达以及激活T淋巴细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等细胞HLA抗原和B7分子表达,同时检测经Ara-C刺激前后B7分子的表达,用RT-PCR方法检测经Ara-C刺激前后激活T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ mRNA。结果HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等恶性血液病细胞株均表达或高表达HLA抗原和B7-2分子,低表达或不表达B7-1分子,经Ara-C刺激后细胞株B7分子的表达明显增强,并能有效地激活T淋巴细胞表达高水平的IFN-γ mRNA。结论大多数人类恶性血液病细胞株均不表达或低表达B7分子,但是B7-1可能在肿瘤免疫中起重要作用。
- 熊秀娟杨铭范冬梅赵英新纪庆王金宏邵晓枫许元富熊冬生周圆杨纯正
- 关键词：B7分子HLAT淋巴细胞
