温州市科技计划项目(Y20110074)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：王明山杨丽红金艳慧谢海啸朱丽青更多>>
- 相关机构：温州医科大学温州医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种导致遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症的FⅫ基因新突变被引量：1
- 2013年
- 目的探讨一个遗传性凝血因子Ⅻ（coagulationfactorⅫ，FⅫ）缺陷症家系的发病机制。方法对先证者及其家系成员的活化部分凝血活酶时间（activatedpartialthromboplastintime，APTT）、血浆FⅫ活性（FⅫprocogulantactivity，FⅫ：C）和血浆FⅫ抗原（FⅫantigen，FⅫ：Ag）等进行表型诊断。用PCR技术对FⅫ基因的14个外显子及其侧翼序列进行扩增和测序。构建F河基因突变体，瞬时转染COS7细胞，测定表达产物的FⅫ：C的活性和FⅫ：Ag含量。结果先证者APTT明显延长至108．1s（正常参考值为27．0～41．0s），其丈夫APTT在正常范围，儿子、女儿和外孙的APTT轻度延长。先证者FⅫ：C和FⅫ：Ag均极度降低至0．01（正常参考值为0．72～1．13），其丈夫、儿子、女儿和外孙的FⅫ：C分别为0．57、0．24、0．14、0．16；FⅫ：Ag分别为0．55、0．27、0．15、0．21。先证者和女儿FⅫ基因第9外显子均发现g．6800—6808del9bp杂合型缺失突变。先证者及儿子、女儿、外孙F皿启动子区46C／T多态性均为TT基因型，丈夫为CT型。体外表达结果显示，突变体在细胞裂解液中FⅫ：Ag水平接近野生型，而在细胞培养上清液中的突变体FⅫ：Ag、FⅫ：C水平降至野生型的一半。结论该遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系的先证者FⅫ基因第9外显子g．6800—6808del9bp为一新发现的突变。突变蛋白在细胞内大量蓄积，但存在分泌障碍。g．6800—6808del9bp和46T／T与FⅫ水平的降低有关，但不是先证者FⅫ水平极度降低的唯一原因。
- 谢海啸吕美艳杨小丽朱丽青杨丽红金艳慧王明山
- 关键词：聚合酶链反应突变体
- 四个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系基因分析被引量：9
- 2013年
- 目的探讨4个遗传性凝血因子Ⅻ（FⅫ）缺陷症家系基因突变及分子发病机制。方法检测凝血酶原时间（PT）、APTT、FⅫ促凝活性（FXII：C）和FⅫ抗原（FⅫ：Ag）等凝血指标；PCR扩增FⅫ基因的全部外显子及侧翼序列，PCR产物纯化后测序；在野生型pIRES2-EGFPFⅫ表达质粒上构建突变体FⅫ表达质粒，瞬时转染COS7细胞，测定细胞裂解液和培养上清中FXII：Ag水平和FⅫ：C。结果4例先证者APW均明显延长，FⅫ：C均〈2％，FⅫ：Ag亦同步下降至1％。4个家系均检出常见的FXI146C／T多态性。家系A先证者检出5741-5742delCA（Hisl01Gin）及7142insertC（Lys346Gin）双重杂合突变；家系B先证者检出6800-6808del9bp杂合缺失突变。FⅫ6800-6808delgbp瞬时转染结果显示，在细胞裂解液中突变体FⅫ：Ag为野生型的85．6％；在细胞培养上清中突变体FⅫ：Ag为野生型的51．9％，FⅫ：C为野生型的56．4％；家系c先证者检出8699G〉A（Gly542Ser）杂合突变；家系D先证者检出8699G〉A（Gly542Ser）纯合突变（其父母为近亲结婚）。结论4个遗传性FXD缺陷症家系除有46C／T多态性外，共发现g．5741—5742delCA、g．7142insertC、g．6800-6808delgbp、g．8699G〉A4种基因突变。其中g．5741-5742delCA和g．6800-6808del9bp为两种新的突变。FⅫ6800-6808del9bp体外表达显示，FXD6800-6808del9bp突变蛋白合成基本正常，但存在蛋白分泌障碍。
- 谢海啸吕美艳杨小丽王明山张扬朱丽青金艳慧杨丽红
- 关键词：家系聚合酶链反应DNA突变分析
- 杂合突变导致遗传性FⅫ缺陷症一家系被引量：8
- 2015年
- 目的 对1个遗传性凝血因子Ⅻ（coagulation factorⅫ,FⅫ）缺陷症家系进行基因突变检测,了解其分子发病机制.方法 检测先证者及其家系成员的活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）、血浆FⅫ活性（FⅫactivity,FⅫ∶C）和血浆FⅫ抗原（FⅫantigen,FⅫ∶Ag）含量等表型指标;用DNA测序法检测先证者FⅫ基因的全部14个外显子及侧翼序列,发现突变位点则予反向测序证实;针对先证者的突变位点,对该家系成员进行相应的基因突变检测.结果 先证者和其儿子APTT、FⅫ∶C和FⅫ∶Ag明显异常,分别为121.5 s、5％、6.8％和98.5s、9％、12.2％,同时纤溶酶原活性（plasminogen activity,PLG∶A）均略高于正常参考值范围;其他家系成员中,除其小女儿和外孙的FⅫ∶C略低外（分别为64％和60％）,其他成员FⅫ∶C均在正常参考值范围（72％～113％）内.先证者和其儿子的FⅫ基因第13外显子发生了g.8597G＞A杂合突变,导致p.Asp538Asn错义突变,FⅫ启动子区46C/T多态性均为TT基因型;其他4名家系成员中均未见g.8597G＞A杂合突变,有3名成员启动子区为46C/T位点为CT基因型和1名成员为TT基因型.结论 该家系中发现的FⅫ基因第13外显子g.8597G＞A突变为一种新突变.此杂合突变导致的p.Asp538Asn错义突变是该家系遗传性FⅫ缺陷症的分子发病机制;p.Asp538Asn和46TT基因型与家系成员的FⅫ水平明显降低有关.
- 杨丽红郝秀萍王莹宇谢海啸金艳慧朱丽青王明山
- 关键词：基因突变多态性家系
- 新的纯合子Leu519Arg导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析被引量：7
- 2015年
- 目的对一个遗传性凝血因子Ⅻ（FⅫ）缺陷症家系进行FⅫ基因突变的分析和家系调查，探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血因子Ⅷ活性（FⅧ：C）、凝血因子Ⅸ活性（FⅨ：C）、FⅪ活性（FⅪ：C）、凝血因子Ⅻ活性（FⅫ：C）和FⅫ抗原（FⅫ：Ag）含量等进行表型诊断；用DNA直接测序法分析先证者FⅫ基因所有14个外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域，用反向测序证实所发生的突变。选择100名健康体检者作对照。结果先证者APTT明显延长为106．4S，先证者二女儿和外孙女APTT略延长，分别为42．8s和43．6s，家系其他成员APTT无明显延长；先证者及其儿子、大女儿、二女儿、外孙女的FⅫ：c明显减低，分别为2．0％、23．0％、23．0％、24．0％和23．0％，FⅫ：Ag含量分别为1．0％、21．0％、23．0％、23．0％和23．0％，表现为交叉反应物质（CRM）阴性。基因测序发现先证者FⅫ基因启动子区为46T／T型及13号外显子存在c．1556T〉C纯合突变，导致Leu519Arg；先证者儿子、大女儿、二女儿及外孙女为46C／T型，并且发现存在c．1556T〉G杂合突变；先证者妻子启动子区C／C型，且无上述基因突变。结论该家系发现的FⅫ基因13号外显子区c．1556T〉G尚未见报道。c．1556T〉G影响了FⅫ催化功能，与FⅫ水平的降低有关。
- 戴利亚张德亭林杰王莹宇童郁李君王明山
- 关键词：系谱纯合子突变
