浙江省自然科学基金(Y204358)
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 相关作者：杨迪生苗旭东徐荣臻叶招明黄新更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨肉瘤治疗的研究进展被引量：5
- 2005年
- 近年来对骨肉瘤的化疗研究已进入分子和基因水平,一批新发现的化疗药物和化疗增敏剂大多已通过Ⅰ、Ⅱ期试验。同时,随着各种新技术和新材料的发展,骨肉瘤保肢手术的安全性和保留的肢体功能得到了显著提高。
- 杨迪生
- 关键词：骨肉瘤骨肿瘤化学疗法免疫疗法膝关节关节成形术
- 可溶性AZURIN分子重组子构建对人骨肉瘤U2OS细胞的杀伤和诱导凋亡被引量：1
- 2005年
- 目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.
- 苗旭东叶招明杨迪生徐荣臻李伟栩陶惠明
- 关键词：凋亡铜绿蛋白质类
- 细菌氧化还原蛋白azurin选择性诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡被引量：8
- 2005年
- 背景与目的:已有研究表明细菌氧化还原蛋白azurin,在体外和荷瘤裸鼠体内可选择性的抑制某些黑色素瘤细胞和人乳腺癌细胞增殖并诱导和激发肿瘤细胞的凋亡,同时发现azurin在荷瘤裸鼠体内诱导肿瘤凋亡使肿瘤体积明显减小,但未发现毒副作用。azurin如何诱导肿瘤细胞凋亡从而达到治疗肿瘤的机制目前仍不明确。本研究旨在探讨azurin对人骨肉瘤U2OS细胞诱导凋亡作用及其可能的分子机制。方法:以不同浓度的azurin培养U2OS细胞。通过MTT法测细胞活性,用Bliss法计算IC50值,荧光显微镜、电镜观察亚细胞结构和凋亡小体形成,琼脂糖凝胶电泳观察DNA“ladder”形成,流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,Westernblot检测细胞Bax、Bcl-2和caspase-3表达情况。结果:细菌氧化还原蛋白azurin能选择性抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长且呈浓度依赖关系并能诱导细胞凋亡,IC50值为(114.54±7.65)mg/L,均高于相同浓度组的人骨肉瘤细胞MG63及正常人肝细胞L-02细胞组(P<0.05)。100mg/L和200mg/Lazurin作用24h后,AO、Hoechst33258和透射电镜见较多的凋亡细胞,出现凋亡小体,部分细胞坏死。琼脂糖凝胶电泳见典型的“ladder”,Annexin-V/PI的FCM检测azurin作用3h就出现凋亡现象,200mg/L的azurin作用48h时凋亡指数达到峰值35.8%,细胞停滞于G1期,而对?
- 叶招明苗旭东杨迪生徐荣臻黄新葛芬芬
- 关键词：AZURIN骨肉瘤BAXBCL-2CASPASE-3
- Fas抗原和caspase-8调控细菌氧化还原蛋白azurin诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨Fas抗原和caspase-8在细菌氧化还原蛋白azurin诱导人骨肉瘤细胞凋亡中的调控机制及作用。方法:用150mg/L浓度的azurin处理U2OS细胞,分别作用6、12、24和48h。细胞免疫化学法检测Fas抗原的表达。用荧光试剂盒检测caspase-8的活性。流式细胞仪检测azurin和抗-Fas-抗体诱导的骨肉瘤细胞凋亡百分率,以及加入caspase-8活性抑制剂IETD-FMK后凋亡百分率的变化。结果:Azurin诱导U2OS细胞凋亡后,与对照组比较,Fas抗原表达强度增加(P<0.01),caspase-8活性升高(P<0.01)。Fas抗原表达和caspase-8活性随着azurin作用时间的延长而逐渐升高,至24h后达到高峰,然后缓慢下降,但仍显著高于对照组(P<0.01)。Fas抗原的表达与caspase-8活性变化呈显著正相关(r=0.873,P<0.01)。表达增强的Fas抗原具有转导凋亡信号的功能,抗-Fas抗体借此增强azurin诱导U2OS细胞凋亡的作用。Caspase-8活性抑制剂IETD-FMK能阻断caspase-8活化而抑制azurin或抗-Fas抗体诱导的U2OS细胞凋亡,与抑制剂组比较,细胞凋亡百分率显著差异(P<0.01)。结论:Fas依赖途径可能为细菌氧化还原蛋白azurin诱导U2OS细胞凋亡主要机制之一,caspase-8活性上调可能在凋亡过程中发挥重要作用。
- 苗旭东杨迪生叶招明徐荣臻冯洁黄新
- 关键词：骨肉瘤细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8
