湖南省研究生科研创新项目(CX2011B050)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 肝癌相关基因HTA的重组表达及蛋白功能研究
- 2011年
- 目的:将肝癌相关基因HTA基因(hepatoma associated gene)进行重组表达,并对HTA蛋白功能进行初步研究。方法:从肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA338-616cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-MBP内,诱导表达MBP-HTA融合蛋白及MBP蛋白,His-tag磁珠纯化试剂盒纯化2种蛋白,并用Western印迹及ELISA方法进行活性鉴定。分别用MBP,MBP-HTA蛋白刺激并培养HepG2细胞,采用MTT法、平板克隆形成实验观察细胞增殖情况,流式细胞术检测刺激前后细胞周期分布的改变。结果:成功地构建了表达分子质量约为52 kD的MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-MBP-HTA。与MBP刺激后的HepG2细胞及阴性对照组相比,MBP-HTA刺激后的HepG2细胞增殖明显;流式细胞术显示MBP-HTA刺激后的HepG2细胞G1期细胞减少,S期细胞增多,细胞增殖活性增强。结论:HTA蛋白可以明显地促进HepG2细胞增殖,这可能与其促进细胞从G1期过渡到S期有关。
- 宋婕刘艳红李亚林李官成
- 关键词：肝细胞癌肝癌相关基因原核表达细胞增殖
