江苏省自然科学基金(BK2010180)
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 相关作者：朱孝荣袁红花朱裕华张丽吴连连更多>>
- 相关机构：徐州医学院实验动物中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金徐州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究
- 2012年
- 目的探讨小鼠胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达。方法通过RT—PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的eDNA，将该基因亚克隆入重组质粒p1（peDNA3．1-Nestin—EGFP）中，构建重组质粒p2（peDNA3．1-Nestin—EGFP—IGF-1），脂质体转染COS-7细胞，ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量。结果克隆IGF-1基因eDNA与GenBank中该基因序列-致，重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白。结论IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中，且能在COS-7细胞中过表达。
- 彭长凌朱裕华张丽袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1小鼠克隆转染
- 脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备
- 2012年
- 目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。
- 吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1转基因小鼠
- 小鼠Nestin启动子的克隆及其表达载体的构建被引量：3
- 2012年
- 目的:克隆Nestin基因启动子序列,并研究其调控能力。方法:用高保真酶PCR扩增出小鼠Nestin启动子全序列、核心序列,pcDNA3.1质粒双酶切切掉CMV启动子序列,将Nestin基因启动子序列插入到原CMV启动子位置,pEGFP-N1质粒双酶切下EGFP序列,克隆入pcDNA3.1多克隆位点中,重组构建质粒,分别用Nestin启动子全序列和核心序列调控EGFP基因的表达。重组质粒分别转染Nestin+细胞和Nestin-细胞,观察EGFP基因在细胞内的表达情况。结果:成功克隆出Nestin基因启动子全序列和核心序列,经酶切鉴定及测序证实正确。二序列皆能调控EGFP在各种细胞内的表达。结论:Nestin基因启动子全序列和核心序列具有非特异性调控能力。
- 张丽袁红花袁凤刚朱孝荣
- 关键词：启动子NESTIN转染
- 携带小鼠IGF-1基因的慢病毒载体构建及其在神经干细胞中的表达
- 2012年
- 目的:构建含有小鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因的慢病毒载体,鉴定其在神经干细胞(NSCs)中的表达。方法:采用RT-PCR方法从小鼠的骨骼肌细胞中扩增IGF-1基因,克隆入pcDNA3.1质粒,构建慢病毒载体pXZ9-IGF-1。用脂质体介导三质粒共转染法转染293FT细胞,获得病毒上清。分离培养神经干细胞,Nestin免疫荧光化学鉴定。慢病毒感染神经干细胞,显微镜下观察GFP表达情况,通过RT-PCR及ELISA试剂盒分别从mRNA和蛋白水平检测IGF-1的表达。结果:通过RT-PCR法从小鼠的骨骼肌细胞中扩增出IGF-1基因并克隆入pcDNA3.1载体,经亚克隆成功构建慢病毒质粒pXZ9-IGF-1。质粒经脂质体转染293FT细胞获高滴度慢病毒颗粒,体外高效感染神经干细胞。神经干细胞经感染后,IGF-1基因mRNA和培养基中蛋白水平均高表达。结论:成功构建含小鼠IGF-1基因的慢病毒载体pXZ9-IGF-1,并在神经干细胞内获得表达。
- 朱裕华彭长凌陈仁金袁红花陈翀朱孝荣
- 关键词：IGF-1基因慢病毒神经干细胞小鼠
- 胰岛素样生长因子-1诱导新生小鼠海马源性神经干细胞增殖分化的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生小鼠海马源性神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法通过取新生C57BL／6J小鼠海马组织，机械分离，体外培养NSCs，特异性标志蛋白Nestin免疫荧光鉴定。在细胞培养液中加入100μg／L的IGF-1记为IGF-1组，同时设立正常细胞对照组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况，GFAP、133Tubulin细胞免疫化学检测细胞分化情况。结果体外成功培养NSCs，特异性蛋白Nes-tin具有表达。IGF-1组NSCs较对照组增殖显著，且IGF-1组细胞具有显著的迁移和分化能力。细胞免疫荧光鉴定，IGF-1可促进细胞分化为星形胶质细胞和神经元（P〈0．05）。结论IGF-1能够促进体外培养的新生小鼠海马源性NSCs增殖，并诱导NSCs向星形胶质细胞和神经元分化。
- 朱裕华胡安康陈仁金吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1神经干细胞小鼠
