辽宁省科技厅自然科学基金(20052171)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
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- 肺炎链球菌菌体蛋白LytA和CbpA对感染小鼠的诊断价值被引量：7
- 2011年
- 目的通过基因工程技术获取肺炎链球菌自溶素（autolysin，LytA）和胆碱结合蛋白A（choline binding proteinA，CbpA），探讨其对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断价值。方法根据GenBank中lytA和cbpA基因保守序列设计合成特异性引物，采用PCR技术从肺炎链球菌基因组中扩增lytA和cbpA保守序列片段；经由IPTG诱导并通过等电点洗脱方法获取纯化的重组蛋白LytA和CbpA；Westernblot测定表达蛋白的抗体结合活性。以LytA和CbpA为抗原，建立ELISA反应模式测定感染小鼠血清中相应的IgG和IgM抗体，评价诊断价值。结果成功构建了原核表达载体pET-32a（＋）／lytA和pET-32a（＋）／cbpA，表达的重组蛋白LytA和CbpA具有较好的抗体结合活性。实验组小鼠（肺炎链球菌感染组）IgM和IgG类抗LytA抗体滴度高于对照组（正常对照组和乙型链球菌感染对照组），差异有统计学意义（P〈0．05），CbpA抗体与正常对照组差异有统计学意义，与乙型链球菌感染组差异无统计学意义（P〉0．05）。CbpA蛋白对感染小鼠诊断的敏感性较高（IgG：83．3％；IgM：75．0％），而LytA特异性较高（IgG：100％；IgM：100％）。结论协同利用重组蛋白CbpA诊断敏感性及LvtA的特异性，对肺炎链球菌感染小鼠的血清学诊断具有一定价值，为进一步用于临床检验奠定基础。
- 霍琳红孙文平杨光陈晨邓燕燕罗红
- 关键词：肺炎链球菌自溶素酶联免疫吸附试验
- 葡萄球菌自溶素的研究进展被引量：4
- 2011年
- 葡萄球菌是人和动物皮肤黏膜的专性寄生菌，目前临床常见的致病菌种主要有金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。金黄色葡萄球菌可引起局部化脓感染，也可引起败血症、脓毒血症等全身感染。表皮葡萄球菌主要引起心内膜炎、败血症等，
- 邓燕燕罗红
- 关键词：葡萄球菌属自溶素耐药性抗菌药
- 肺炎链球菌表面黏附素A的原核表达及免疫保护性研究
- 2009年
- 目的利用基因工程技术获取原核表达的肺炎链球菌表面黏附素A(PsaA)蛋白并初步研究其对小鼠的免疫保护性。方法根据基因库中psaA基因序列设计合成特异性引物,从临床分离到的肺炎链球菌中提取DNA,PCR技术扩增目的基因psaA,克隆后构建原核表达载体PET-32a(+)/psaA,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,获得重组蛋白,并通过Western-blot鉴定其免疫活性。将重组蛋白免疫小鼠,观察对肺炎链球菌感染动物的保护作用。结果经酶切及测序鉴定,克隆出870bp的目的基因,DNA序列与Gen-Bank中的相应数据符合率为100%;成功构建出原核表达载体pET-32a/psaA;经IPTG诱导,表达出了约57kD左右的融合蛋白,与预期大小相符,并且具有抗体结合活性;重组PsaA蛋白对肺炎链球菌感染小鼠具有一定保护作用。结论在原核细胞中成功表达出PsaA蛋白,能在一定程度上抵抗肺炎链球菌感染,为基于黏附素的新型疫苗的研究提供线索。
- 吴艳丽孙文平杨光罗红
- 关键词：肺炎链球菌PSAA抗原性原核表达
- 自然感染途径建立肺炎链球菌感染性肺炎小鼠模型被引量：13
- 2011年
- 目的探索自然感染途径制备肺炎链球菌感染性肺炎小鼠模型的方法,为肺炎链球菌性肺炎的相关研究提供实验基础。方法肺炎链球菌标准菌株(CMCC 31203)经血平板培养18 h后配成2麦氏浊度。小鼠浅麻醉状态下,破损鼻黏膜,滴注一定量肺炎链球菌菌液。于3、7、14和21 d分别处死小鼠,取肺脏进行组织病理学观察,确定肺炎小鼠模型制备的最佳方式。结果鼻黏膜破损组小鼠3 d时肺泡间隔内毛细血管扩张,肺泡腔内以红细胞和纤维素渗出为主;7 d时病变以纤维素和中性粒细胞浸润为主;14 d时肺泡腔内渗出减少,炎症开始减轻;21 d时肺脏外观趋于正常,肺泡腔内渗出物质基本溶解吸收。结论以3×107CFU的肺炎链球菌菌液通过破损的鼻黏膜感染7 d时可以制备出比较典型、稳定的肺炎小鼠模型。
- 孟一鸣孙文平杨光高文婷罗红
- 关键词：鼻黏膜肺炎链球菌肺炎动物模型
