河北省科技攻关计划(05276169)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：张广宇谢兰品陈素丽吴雪琼李香兰更多>>
- 相关机构：河北省胸科医院解放军第309医院更多>>
- 发文基金：河北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分支杆菌分泌蛋白Mtb81克隆、表达、纯化及血清学诊断价值的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的通过结核分支杆菌Mtb81基因在大肠杆菌中的表达,获得大量纯化的重组Mtb81蛋白。通过Western-blot和ELISA方法评价Mtb81抗原,检测血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性,为进行结核病血清学诊断打下基础。方法应用PCR技术扩增结核分支杆菌H37Rv Mtb81DNA序列;构建pET24b-Mtb81重组质粒,然后转化入表达宿主大肠杆菌BL21(DE3);通过Western-blot鉴定重组Mtb81蛋白,采用Chelating Sepharose Fast Flow纯化重组Mtb81蛋白;将纯化的重组Mtb81蛋白通过Western-blot、酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测结核病人及正常人血清中的抗体,应用Microsoft Excel软件统计分析实验数据。结果pET24b-Mtb81在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%左右。纯化后的Mtb81样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95%左右。纯化后的Mtb81蛋白通过Western-blot鉴定,结果显示:加入结核病人血清抗体于目的蛋白位置有一条显色带,而加入正常人血清组则无显色反应;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测30例结核病人及正常人血清中的抗体,结果显示:rMtb81的特异性和灵敏度分别为96%、93%。结论pET24b-Mtb81大肠杆菌工程菌株能高效表达Mtb81蛋白,Western-blot结果证明表达蛋白具有很好的免疫反应性和抗原特异性;ELISA结果证明重组Mtb81检测结核病人血清中的抗结核抗体,具有较高的灵敏度和特异性。
- 李香兰张广宇吴雪琼李建行陈素丽谢兰品
- 关键词：结核分支杆菌克隆纯化免疫反应性抗原特异性
