国家教育部博士点基金(20070631006)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选
- 2010年
- 目的:构建和筛选能高效、特异性抑制Coronin-1基因表达的siRNA表达载体。方法:提取鼠巨噬细胞总RNA,RT-PCR扩增Coronin-1基因目标序列,克隆入pSEB-HUS真核表达质粒,构建pSEB-HUS-C重组质粒。将设计、合成的3条siRNA及阴性对照分别克隆入pSEB-HUS-C,构建重组pSEB-HUS-C1、pSEB-HUS-C2、pSEB-HUS-C3及pSEB-HUS-CN质粒。将干涉质粒瞬时转染A549细胞,通过绿色荧光信号观察、实时定量PCR和Western blot法检测其对Coro-nin-1基因表达的影响。结果:经双酶切及测序证实,所构建siRNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。经瞬时转染A549细胞后,其中的pSEB-HUS-C3能明显抑制Coronin-1 mRNA的表达和Coronin-1蛋白的合成,抑制率分别是75.9%和75.1%。结论:成功构建并筛选出高效、特异性抑制Coro-nin-1表达的siRNA表达载体,为进一步研究Coronin-1在巨噬细胞中的作用奠定基础。
- 严莎陈全吕玉春侯艳王瑜伟
- 关键词：RNA干扰结核分支杆菌
- 靶向肠道病毒71型VP1基因的siRNA表达质粒的构建被引量：1
- 2010年
- 目的构建靶向肠道病毒71型(EV71)VP1基因的siRNA表达质粒,并进行鉴定。方法构建靶向EV71VP1基因的siRNA表达质粒pSVSi1、pSVSi2和pSVSi3;脂质体法转染A549细胞株,筛选阳性克隆,通过荧光定量PCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平鉴定EV71VP1基因的表达。结果质粒pSVSi1、pSVSi2和pSVSi3经测序证明构建正确。pSVSi1对A549细胞VP1基因的抑制效果最好,在mRNA和蛋白水平上的抑制率分别为87%和89%,pSVSi2和pSVSi3在mR-NA水平上的抑制率分别为60%和70%。结论已成功构建了靶向EV71VP1基因的siRNA表达质粒,并筛选出一种对VP1基因有显著抑制作用的siRNA,为手足口病的siRNA基因治疗奠定了基础。
- 吕玉春陈全严莎候艳
- 关键词：肠道病毒A型VP1基因RNA干扰小分子干扰
