河北省自然科学基金(C2005000654)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：李永清周雪媚张飚冯国民章振华更多>>
- 相关机构：中国农业大学北京市农林科学院畜牧兽医研究所河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 表达禽流感HA基因的重组马立克氏病病毒的构建被引量：4
- 2007年
- 本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因,大小约1 700 bp,将其克隆到真核表达载体pcDNA中,并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆入马立克氏病病毒US2基因中,成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体。然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过蓝斑筛选获得重组病毒。该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因。免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白,表达的HA蛋白具有血凝活性。
- 周雪媚霍惠玲佘锐萍李永清冯国民章振华王宏俊
- 关键词：禽流感病毒HA基因重组马立克氏病病毒
- 禽流感病毒HA1基因的克隆及原核表达被引量：6
- 2006年
- 用RT-PCR方法扩增出禽流感病毒A/Muscovyduck/Fujian/2/2000(MF00)株部分HA基因,大小约900bp,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行了序列的分析。通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将HA基因亚克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,成功构建了阳性重组表达质粒,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导表达,结果禽流感HA基因在pGEX4T-3系统中得到高效表达,经Westernblotting检测证实表达产物有生物学活性。
- 周雪媚霍惠玲张飚李永清王连群
- 关键词：禽流感病毒HA1基因克隆原核表达
