四川省教育厅重点项目(2003A024)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：汪铭书程安春杨梅陈斌陈孝跃更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川省兽医防疫检疫总站更多>>
- 发文基金：四川省重点科学建设项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”四川省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究被引量：1
- 2007年
- 为检测鸭α-干扰素对鸭细胞免疫的调节作用，本文按常规方法构建了鸭α-干扰素真核表达质粒（pcDNA-DuIFN-α），并以50、100、200μg分别肌注28日龄樱桃谷鸭，15d后免疫鸭病毒性肝炎（DVH）弱毒疫苗，设空载体＋DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA—DuIFN-α对照组，采用流式细胞仪（FACS）和淋巴细胞增殖试验（MTT法）分别对免疫鸭外周血的CD3^＋淋巴细胞总数和T淋巴细胞转化能力进行动态检测。结果：①CD3^＋淋巴细胞数量：7～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，14～28d 100μg组显著（P≤0．05）高于50和200μg组；②T淋巴细胞对ConA的反应能力（OD值）：21～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，50和100μg组差异不显著，28～56d均略高于200μg组。研究表明pcDNA—DuIFN—α是一种优秀的鸭细胞免疫的分子增强剂和DVH弱毒疫苗的分子佐剂，肌注100μg／只的效果最佳。
- 刘闯程安春汪铭书陈斌程志萍段坤杨梅周雪陈孝跃
- 关键词：细胞免疫调节
- 鸭病毒性肝炎的病原分离和鉴定被引量：6
- 2007年
- 从间接免疫荧光检测呈DVH阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30～40nm,对氯仿、pH3.0、50℃,60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24～60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型DHV高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均呈现DVH阳性。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV,为有效预防DVH提供了有用的实验数据。
- 陈海军程安春汪铭书朱德康杨苗周毅陈孝跃
- 关键词：鸭病毒性肝炎病原
- 基因枪轰击鸭IFN-α因疫苗对鸭瘟弱毒疫苗的细胞免疫调节作用
- 将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)以每只1、3、6 ug三个剂量基因枪轰击法免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA为对照。各组15 d后接种鸭瘟弱毒疫苗,3 d后开始采血,采用淋巴细...
- 程志萍程安春汪铭书陈斌刘闯段坤周雪陈孝跃
- 关键词：基因枪细胞免疫
- 文献传递
- 鸭IFN-α成熟片段基因的克隆、原核表达及抗鸭瘟病毒活性初步研究
- 利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T 载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达。表...
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌
- 关键词：原核表达
- 文献传递
- 基因枪轰击注射鸭α-干扰素基因疫苗对免疫鸭抗鸭瘟强毒感染的影响
- 2007年
- 将鸭α-干扰素基因疫苗pcDNA-SDIFN-α分别按每只1、3和6μg剂量采用基因枪轰击方式免疫樱桃谷鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA 3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,注射后第15 d给每只鸭人工感染鸭瘟强毒。结果显示,1μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭有3/12死亡,PBS和空载体注射鸭分别有5/12和4/12死亡;3μg和6μg pcDNA-SDIFN-α免疫鸭以及鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭100%受到保护。3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量显著低于PBS和空载体对照组,而3个pcDNA-SDIFN-α免疫组之间差异不显著。表明,基因枪轰击pcDNA-SDIFN-α免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用。
- 周雪程安春汪铭书杨梅段坤卢菲程志萍刘闯陈孝跃陈斌
- 关键词：基因枪鸭瘟病毒
- 鸭α干扰素基因疫苗对DVH弱毒苗免疫鸭的细胞免疫调节作用研究
- 将鸭α干扰素(IFN-α)基因疫苗(pcDNA-DuIFN-α)以50、100、200μg三个剂量分别肌注免疫28日龄樱桃谷鸭,15天后免疫鸭病毒性肝炎(DVH)弱毒疫苗;同时设空载体+DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱...
- 刘闯程安春汪铭书陈斌程志萍段坤杨梅周雪陈孝跃
- 关键词：细胞免疫调节
- 文献传递
- 间接免疫酶组化检测DHV方法建立及其抗原定位研究
- 建立检测鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV)的免疫组化方法,为DHV感染的实验室诊断、感染雏鸭体内的DHV抗原亚细胞定位研究提供有效的检测手段,阐明DHV在感染细胞内繁殖部位。用蔗糖密度梯度离心...
- 陈海军程安春汪铭书
- 关键词：免疫组化DHV雏鸭抗原定位
- 文献传递
- 重组鸭α-干扰素基因工程菌表达条件的研究被引量：7
- 2007年
- 摘要：为了确定重组鸭α-干扰素（DuIFN—α）基因工程菌BL21（DE3）/pEW32a^＋-DuIFN—α的最佳表达条件，对影响原核表达的主要因素：IPTG浓度、诱导时期、收获时间、培养诱导温度、葡萄糖浓度及培养基进行了优化；并利用抗性筛选对表达质粒的稳定性进行了研究。结果显示，诱导基因工程菌BL21（DE3）/pEW32a^＋ -DulFN—a表达DuIFN—α的最佳条件为：以TB＋5g九葡萄糖培养基37℃培养至菌体OD600=0．8～1．1时，加入IPTG至终浓度0．2mmol/L，30℃诱导培养4～5h。在最佳表达条件下，DuIFN—α的相对含量为34．1％，总含量（终菌体浓度×相对含量）达79．9；各种优化条件对表达质粒的稳定性未见明显影响。
- 杨梅程安春汪铭书张瑶龚永强陈斌
- 鸭IFN-α成熟肽基因的原核表达、复性及其抗病毒活性研究被引量：4
- 2008年
- 为获得鸭α-干扰素(DuIFN-α)并研究其生物学功能,将DuIFN-α成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)、鸭瘟强毒(DPV)活性进行研究。结果表明:BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α经0.4mmol/L IPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白相对分子质量约37 ku,以包涵体形式存在;重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12 800 U/mg;利用定量PCR检测到15 U/mL的重组DuIFN-α对鸭瘟强毒表现出抑制作用,为重组DuIFN-α的临床应用提供试验数据。
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌钟小容
- 关键词：成熟肽基因原核表达色谱复性抗病毒活性
- 鸭α-干扰素基因疫苗肌肉注射免疫鸭抗鸭瘟强毒感染的研究被引量：2
- 2007年
- 将本实验室构建的鸭α-干扰素基因疫苗(pcDNA-SDIFN-α)分别按每只50、100、200μg3个剂量肌肉注射免疫樱桃谷鸭,以PBS、空载体质粒pcDNA3.1(+)和鸭瘟弱毒疫苗为对照,免疫15d后攻击感染鸭瘟强毒,于攻毒后2h、6h、12h、24h、3d、6d、9d、14d、22d、26d、33d和40d采全血,同时取死亡鸭的各组织器官,采用实时荧光定量PCR对鸭瘟病毒在鸭外周血中的动态变化和在各组织器官中的分布及含量进行检测。结果表明:①3个剂量pcDNA-SDIFN-α和鸭瘟弱毒疫苗都对鸭产生良好保护作用,免疫鸭未发生死亡;而PBS和空载体对照组3只鸭中有1只鸭死亡,死亡鸭心、肝、脾、肾、胰和各段肠管中均检测到鸭瘟病毒DNA且其含量大于pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血病毒DNA含量;②3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量比PBS和空载体对照组低,差异显著(P<0.05),特别是在2h差异极显著(P<0.01);攻毒后24h内,3个剂量pcDNA-SDIFN-α免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量均低于鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭,差异显著(P<0.05);3个不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组之间外周血鸭瘟病毒DNA含量差异不显著(P>0.05),攻毒初期,200μg免疫鸭外周血鸭瘟病毒DNA含量最低,100μg次之,50μg最高。研究表明,pcDNA-SDIFN-α肌肉注射免疫鸭后能产生一定的抗鸭瘟强毒感染的作用,并在攻毒初期表现出一定的量效关系。
- 周雪程安春汪铭书杨梅段坤卢菲程志萍刘闯
- 关键词：荧光定量PCR鸭瘟病毒
