国家自然科学基金(30500343)
- 作品数：7 被引量：49H指数：4
- 相关作者：李英侯喜林高红亮宋玉萍王建军更多>>
- 相关机构：南京农业大学上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”江苏省高技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建
- 2008年
- 根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。
- 高红亮李英宋玉萍马成英侯喜林
- 关键词：不结球白菜
- 不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因的克隆及光诱导表达被引量：1
- 2007年
- 采用RT-PCR、巢式PCR、3′RACE和5′RACE技术,获得了不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH)基因cDNA2 034 bp全长序列。以苏州青为材料,进行光及黑暗对照处理,观察GLDH活性和L-抗坏血酸含量的日变化规律。结果表明:随着光照时数的增加,不结球白菜L-抗坏血酸水平和GLDH活性升高,而在持续黑暗条件下植株的L-抗坏血酸含量和GLDH活性没有发现这种日变化,表明GLDH活性可能受光诱导调控。
- 任锡亮李英侯喜林王枫
- 关键词：不结球白菜光诱导L-抗坏血酸
- 不结球白菜硝酸还原酶基因BcNR的克隆及其在拟南芥中的转化被引量：5
- 2009年
- 【目的】克隆不结球白菜硝酸还原酶基因(BcNR),并转化拟南芥做初步的功能鉴定。【方法】采用分段RT-PCR及3′RACE和5′RACE技术克隆了BcNR基因的全长cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析和蛋白结构分析。构建pCAM-BcNR植物过量表达载体,通过农杆菌介导的真空渗透法将其转入野生拟南芥中,经抗性筛选及PCR验证获得T0代转基因植株,用Real-timePCR方法对30mmol·L-1KNO3溶液处理的转基因拟南芥的硝酸还原酶基因表达进行检测,并测定转基因植株的硝酸还原酶活性。【结果】获得了编码不结球白菜硝酸还原酶基因(BcNR)的cDNA全序列3049bp,包含有2733bp的开放阅读框,编码910个氨基酸。其氨基酸序列与拟南芥、烟草、甘蓝型油菜、马铃薯等编码的氨基酸序列具有较高同源性。蛋白质结构域分析表明,所推导的氨基酸序列具有完整的硝酸还原酶结构,同时证明从不结球白菜中克隆的这条基因属于NADH-NR型。GenBank登录号为EU662272。转基因拟南芥T0代植株进行GUS基因PCR检测,证明重组质粒已整合到转基因植株基因组中。硝酸盐处理后的转基因植株硝酸还原酶基因的表达比野生型显著提高,且硝酸还原酶活性有不同程度的提高。【结论】本研究首次从不结球白菜中克隆获得BcNR基因的全长cDNA序列,揭示了其序列特征并对其进行了初步的功能鉴定,为进一步利用该基因开展蔬菜硝酸盐含量的基因调控研究奠定了基础。
- 孙菲菲侯喜林李英高红亮张昌伟
- 关键词：不结球白菜硝酸还原酶克隆
- 不结球白菜离体培养与植株再生体系研究被引量：21
- 2008年
- 以4个不结球白菜品种为试材，对外植体、苗龄、激素的组配、培养基中琼脂和AgNO3浓度等再生因素进行了筛选优化，并探讨了抗坏血酸（AsA）对不结球白菜不定芽分化的影响。结果显示：以4～7d苗龄的带柄子叶为外植体诱导不定芽效果较好；MN培养基中4mg／L 6-BA与0．5mg／L NAA的搭配有利于不定芽形成；琼脂的浓度变化对不定芽分化影响较大，以9g／L琼脂为宜；培养基中添加5～7．5mg／L的AgNO3、0．1～0．5mmol／L的AsA可显著提高不定芽的发生频率和质量。通过不定芽继代培养、生根培养和驯化移栽建立了能够获得较高再生频率的不结球白菜离体再生体系。
- 高红亮李英宋玉萍高素燕王建军
- 关键词：不结球白菜不定芽离体培养
- 白菜GLDH基因cDNA的克隆及序列分析
- 2006年
- 以白菜品种‘苏州青’cDNA为模板,采用RT-PCR、巢式PCR、3’RACE和5’RACE技术,获得了L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(EC1.3.2.3,GLDH)基因cDNA2034bp全长序列。序列分析表明,GLDH基因cDNA序列编码601个氨基酸。其氨基酸序列与花椰菜GLDH基因具有98%的同源性,与拟南芥GLDH基因具有90%的同源性。该基因在GenBank中登录号为AY899298。
- 任锡亮侯喜林李英
- 关键词：白菜L-抗坏血酸
- 不结球白菜分子遗传图谱的构建及分析被引量：8
- 2009年
- 以不结球白菜常州乌塌菜和二青杂交产生的181株F2代分离材料为作图群体,利用ISSR、RAPD、SSR、SRAP等分子标记来构建不结球白菜分子遗传连锁图谱.结果表明,构建的连锁图谱包含11个连锁群,由139个标记组成,其中包括4个ISSR标记、19个RAPD标记、22个SSR标记和94个SRAP标记.其中偏分离标记37个,占26.6%;每条连锁群上的标记数在4～33个之间,连锁群长度在61～164cM的范围,覆盖基因组950cM,总平均图距6.8cM.
- 单晓政李英高素燕马成英刘同坤朱玉英侯喜林
- 关键词：不结球白菜分子遗传图谱ISSRRAPDSSRSRAP
- 不结球白菜维生素C积累与相关酶活性研究被引量：14
- 2007年
- 对不结球白菜‘常州乌塌菜’、‘矮脚黄’和‘二青’生长过程中维生素C(AsA)含量和L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GalLDH)、抗坏血酸氧化酶(AAO)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)的活性进行测定分析,结果显示,AsA含量的积累呈先升高后下降的模式,且‘常州乌塌菜’中的AsA含量显著高于‘矮脚黄’和‘二青’;GalLDH活性与AsA含量变化趋势基本一致,且3个品种中GalL-DH活性与AsA积累之间均呈极显著的正相关关系;AAO和APX活性的变化趋势则与AsA含量变化趋势相反,而‘常州乌塌菜’中AAO活性显著低于其它2个品种,但APX活性无显著差异;MDAR和DHAR的活性则主要表现在生长后期。结果表明,不结球白菜中AsA含量主要受GalLDH酶活性调节,同时AsA代谢酶AAO也对AsA积累起到了重要作用,而MDAR和DHAR酶活性对AsA积累的作用主要在生长后期。
- 宋玉萍李英高红亮王建军侯喜林
- 关键词：不结球白菜抗坏血酸抗坏血酸过氧化物酶
