创新研究群体科学基金(30221001)
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 相关作者：张林徐健蓉庞秋霞屈艺彭晓东更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院四川大学西南科技大学更多>>
- 发文基金：创新研究群体科学基金四川省青年科技基金四川省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异表达蛋白分析被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:维甲酸耐药机制有待进一步的深入研究。蛋白质组学以所有蛋白质为研究对象,从细胞水平及整体水平研究蛋白质的组成及其变化规律。本实验应用蛋白组学技术整体比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞蛋白表达谱,筛选差异表达蛋白,以期获得维甲酸耐药相关蛋白。方法:提取维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的总蛋白,通过双向凝胶电泳分离,获得二者高质量的蛋白表达谱,经PDQuestv7.1软件比较分析,筛选出二者间差异表达的蛋白质点,通过质谱仪鉴定表达差异的蛋白。结果:获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱。PDQuestv7.1软件分析结果表明,MR2细胞及NB4细胞的pH4～7双向凝胶电泳所展示的蛋白点分别有(890±45)个和(912±56)个。二者间有57个差异显著的蛋白点,其中23个在MR2细胞中上调,34个下调。经质谱鉴定了10个蛋白,鉴定成功率达70%,鉴定的蛋白涉及癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:应用双向凝胶电泳技术整体展示了维甲酸耐药细胞株MR2及敏感细胞株NB4的蛋白表达谱,并分析、鉴定、筛选出与维甲酸耐药相关的差异表达蛋白,为进一步从多因素角度研究认识维甲酸耐药机制提供了新的线索。
- 秦慧刘霆杨金亮黄欣柳斌宋鑫赵霞魏于全
- 关键词：差异表达蛋白维甲酸耐药NB4细胞株
- IL-18-PE38重组免疫毒素的原核表达及其鉴定被引量：5
- 2004年
- 目的 构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法 首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组载体经限制性内切酶、PCR及 DNA序列测定等证实连接片段的正确性后 ,再转染感受态大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导表达 ,表达产物用 SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果 酶切分析、PCR鉴定和 DNA测序等证实 ,IL - 18- PE38免疫毒素的原核表达载体被成功构建 ,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗 IL - 18的特异性抗体所识别。结论 IL - 18- PE38融合基因原核表达载体的获得 ,为进一步研究其对 Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。
- 李虹李明远蒋忠华吕梅励张林
- 关键词：IL-18绿脓杆菌外毒素重组免疫毒素原核表达
- 稳定表达小鼠白介素12的间充质干细胞株的筛选与鉴定
- 2009年
- 目的筛选获得慢病毒介导的分泌表达小鼠白介素12(mIL-12)的间充质干细胞株。方法采用PCR反应从pORF-mIL-12中扩增得到mIL-12基因的完整序列,克隆入pENTRTM11质粒,构建含小鼠IL-12基因的重组质粒pENTR-mIL-12,与pLenti6/V5-Dest质粒进行细胞外重组,得到pLenti6/V5-mIL-12质粒,经PCR、多酶切鉴定正确后送Invitrogen公司上海分公司测序;用293FT细胞进行病毒包装,得到具有感染性的病毒;分离小鼠间充质干细胞,用杀稻瘟素筛选Lenti-mIL-12-MSC的稳定表达株,并鉴定。结果构建了重组质粒pENTR-mIL-12和pLenti6/V5-mIL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变;包装得到Lenti6/V5-mIL-12病毒;筛选得到稳定表达的Lenti-mIL-12-MSC细胞株,并用RT-PCR方法及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测验证了mIL-12体外表达。结论筛选得到稳定表达mIL-12的间充质干细胞株。
- 徐健蓉李红霞王国庆杜小波魏于全赵菊梅
- 关键词：白细胞介素12间充质干细胞慢病毒载体
- 抗AIB1-C单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2007年
- 目的:建立分泌抗AIB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对分泌的单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:以纯化GST-AIB1-C蛋白为免疫原,免疫BAL b/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA筛选。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗AIB1-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经Western-blot和免疫细胞化学法鉴定,这些McAb特异性高,亲和力强。结论:成功研制出抗AIB1-C单克隆抗体,为双抗体夹心法ELISA试剂盒的研制奠定基础。
- 庞秋霞彭晓东章崇杰魏大鹏张林母得志屈艺
- 关键词：细胞融合酶联免疫吸附测定
- 抗AIB1-N单克隆抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的获得有生物活性的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端(amplifiedinbrestcancer1-Nterminal,AIB1-N)单克隆抗体。方法以谷胱甘肽转硫酶耦联的抗乳腺癌扩增性抗原1氮端蛋白(GST-AIB1-N)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AIB1-N单克隆抗体,用间接ELISA和Western-blot鉴定其亚类和抗原结合特异性。结果成功筛选出一株稳定分泌抗AIB1-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类为IgG1,经Western-blot鉴定该McAb特异性高,亲和力强。结论成功制备了抗AIB1-N单克隆抗体,为深入研究AIB1的表达及临床应用提供了有力的工具。
- 庞秋霞彭晓东郄明容朱月明彭旭红董薇张林屈艺
- 关键词：单克隆抗体
- 川麦冬超细微粉的表征被引量：1
- 2008年
- 为了探索川麦冬普通粉和超细微粉间表面特性和溶出性的差异,通过普通光学显微镜、电子显微镜对普通粉和超细微粉的形态学观察,并对粒径、分布宽度、比表面积、松密度、压缩度及其浸出物等测定对其普通粉和超细微粉进行比较分析。结果显示,与普通粉相比,超细微粉颗粒大小均匀,中位粒径D50为15.274μm,较普通粉降低7倍;松密度和压缩度下降;比表面积提高2.4倍;水、醇浸出物的干膏率分别增加40%和328%。因此,川麦冬经超细粉碎后,颗粒大小分布均匀,均质度明显改善,比表面积及水、醇溶性物溶出量显著增加,从而生物利用度提高。
- 徐健蓉张清东蒋琪英郑林用
- 关键词：超细粉体川麦冬
- 胡椒碱诱导人红白血病细胞株K562的分化被引量：3
- 2008年
- 背景与目的:白血病是一种血液系统的恶性肿瘤,诱导分化是治疗白血病非常有效的方法之一。胡椒碱(piperine)是一种从胡椒属植物中提取的生物碱,具有镇静、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性。本研究旨在探讨胡椒碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法:采用台盼蓝染色计数法绘制生长曲线和流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,观察胡椒碱对K562细胞增殖的影响;通过观察细胞形态学变化、检测硝基蓝四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力、流式细胞术检测细胞表面标志CD33和CD14的变化,探讨胡椒碱对K562细胞的诱导分化作用。结果:20μmol/L和40μmol/L胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬细胞和单核系细胞分化。40μmol/L胡椒碱作用3d,K562细胞的NBT还原阳性率由(8.5±1.9)%上升到(76.7±5.3)%;20μmol/L胡椒碱作用3d,流式细胞术结果显示细胞表面分化抗原CD33的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)下降42.05%(P<0.01),而CD14的MFI则升高了1倍(P<0.01);20μmol/L以上浓度的胡椒碱对K562细胞的增殖具有抑制作用,其抑制作用随时间的延长或剂量的增加有增强的趋势。结论:胡椒碱可诱导K562细胞向巨噬和单核系细胞分化。
- 宋其芳瞿燕春郑红波张高华林鸿刚杨金亮
- 关键词：胡椒碱白血病诱导分化
- 川麦冬须根超细微粉的特征研究被引量：3
- 2009年
- 目的探索川麦冬须根普通粉和超细微粉间表面特性和溶出性的差异,以便更好地利用川麦冬须根资源。方法通过普通光学显微镜、电子显微镜对普通粉和超细微粉的形态学观察,通过对粒径、分布宽度、比表面积、松密度、压缩度及其浸出物测定等方法对其普通粉和超细微粉进行比较分析。结果与普通粉相比,超细微粉颗粒大小均匀,平均粒径D50为15.108μm,较普通粉降低5.8倍;松密度和压缩度下降;比表面积提高2.6倍;水、醇浸出物的干膏率分别增加45%和457%。结论川麦冬须根经超细粉碎后,颗粒大小分布均匀,均质度明显改善,比表面积及水、醇溶性物的溶出量显著增加,从而生物利用度提高。
- 张清东徐健蓉苟兴能舒晓燕王永生
- 关键词：川麦冬须根溶出量
- 小鼠MIP-1α-DT390重组免疫毒素原核表达载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的构建小鼠MIP-1α基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的原核融合表达载体,诱导并鉴定该蛋白的表达。方法通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,通过PCR扩增质粒SRα-DT390获得DT390基因,酶切、连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组质粒证实构建成功后,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导融合蛋白表达,并用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法鉴定。结果成功构建了mMIP-1α与DT390基因的原核融合表达载体pET-32a(+)-mMIP-1α-DT390,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达蛋白的相对分子质量与预期值一致,并可被抗mMIP-1α和抗白喉毒素的特异性抗体所识别。结论获得了mMIP-1α与DT390融合基因在原核系统中的稳定表达,为研究其临床应用奠定了基础。
- 吕梅励李虹梁伟波李明远蒋忠华贾怡陈文捷张林
- 关键词：MIP-1Α重组免疫毒素原核表达
