广东省教育部产学研结合项目(2010B090400500)
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 相关作者：谢秋玲洪岸熊盛王一婷杨依丽更多>>
- 相关机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目“重大新药创制”科技重大专项广州市重大科技专项计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 表达TNFR-Fc的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺的放大及其活性检测被引量：2
- 2012年
- 目的观察在旋转振荡培养工艺放大条件下,表达肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(TNFR-Fc)的重组CHO细胞稳定性及其表达产物活性。方法采用旋转振荡悬浮培养CHO细胞,至对数生长期时,接种不同培养体积(10 ml、250 ml、1.5 L),于31℃继续培养,每日取样检测不同培养体积下的细胞密度、细胞活力、融合蛋白浓度;经MabSelect Sure亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE、ELISA、MTT法进行纯化产物的相对分子质量和纯度及结合活性、中和活性的检测。结果重组CHO细胞在旋转振荡培养条件下,由10 ml放大到1.5 L培养体积时,细胞的生长密度、活力及蛋白表达量均相对稳定;纯化的融合蛋白纯度在94%以上,相对分子质量约75 000,可与重组人TNFα特异性结合,其相对亲和力与标准品十分接近,且可中和重组人TNFα的细胞毒效应。结论明确了表达TNFR-Fc融合蛋白的重组CHO细胞旋转振荡培养工艺放大的可行性,为更大规模发酵生产奠定了基础。
- 王一婷雷云黄鹂谢奎杨依丽陈宝琼谢秋玲洪岸熊盛
- 关键词：生物反应器CHO细胞
- CHO-DG44细胞瞬时转染条件的优化被引量：2
- 2013年
- 目的优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件。方法采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度。结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的最佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5;转染后4 h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养。在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45%,相对荧光强度可达9×105RFU/106cells。结论优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础。
- 黎美香陈先金王晓慧王亚玉袁凤媚汪才坤谢秋玲
- 关键词：转染
- 利用高通量生物反应器优化一种CHO细胞无血清培养基
- 2011年
- 研究以DMEM/F12(1:1 V/V)培养基为基础,添加不同添加剂优化一种适宜CHO DG44细胞生长的廉价培养基。以细胞密度和细胞活率为主要指标,对DMEM/F12(1:1 V/V)培养基进行了优化。通过正交试验和单因素试验筛选出了CHO DG44细胞生长的最佳培养基。正交试验结果表明添加8mg/L Insulin、10mg/L Transferrin、12mM Glutamine、9mg/L Ethanolamine、9mg/L Sodium selenite、0.5×Lipids、0.5×Vitamin,对细胞生长有较好促进作用,细胞密度从0.6×106 cells/mL上升到1.8×106 cells/mL。在此基础上添加2.5g/L Malt Peptone和2.5g/L YeastExtract可使细胞密度达到2.65×106 cells/mL,基本上达到商业培养基的培养效果,而成本降低了约60%。
- 陈先金彭雯丹郭欣泳陈小佳谢秋玲
- 关键词：CHO细胞无血清培养基
- 抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定
- 2012年
- 目的筛选得到稳定表达重组人源化抗HER2单克隆抗体(rhHER2-mAb)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)最优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力。方法使用一次性旋转振荡生物反应器——Tube-spin对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物的纯度,夹心ELISA检测产物的表达量,MTT检测产物的活性。结果通过比较,确定产量最高的#38细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到(152±20)mg.L-1。纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为150×103,纯度在96%以上,与商品化的赫赛汀一致;活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当。结论通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础。
- 黄鹂黎美香雷云王一婷谢奎杨依丽陈宝琼谢秋玲洪岸熊盛
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞活性检测
