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三种免疫抑制剂对HBV质粒感染小鼠HBV复制的影响: 2015年; 目的应用小鼠模型评价3种临床常用的免疫抑制剂对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法利用高压水注射法将HBV质粒p AAV/HBV1.2导入Balb/C小鼠肝内,建立小鼠HBV复制模型;将Balb/C小鼠随机分成4组,每组10只,分别给予生理盐水(Saline)、FK506、DEX和CYP处理。1w后,将供体C57BL/6小鼠皮瓣移植至上述经免疫抑制剂或生理盐水处理的Balb/C小鼠,皮肤移植后继续使用上述免疫抑制剂或生理盐水至观察期结束。采用电化学免疫发光法检测血清HBs Ag、HBs Ab和HBc Ab水平,采用Real-time PCR法检测血清病毒载量。结果FK506、地塞米松和环磷酰胺处理小鼠移植皮瓣的存活时间分别为(21.50±3.09)d、(21.50±3.09)d和(21.40±1.52)d,分别较生理盐水处理组(8.67±1.86)d明显延长[P=0.037、P=0.000和P=0.000];FK506处理组小鼠HBV复制及其抗体产生与对照组无显著性差异,地塞米松处理组在药物处理期间能维持病毒复制,但停药后病毒DNA和HBs Ag迅速下降至检测水平以下,至观察终点仍未检出HBs Ab和HBc Ab阳性,环磷酰胺能明显延长小鼠HBV复制的持续时间,即使在停药后16 w血清HBV DNA和HBs Ag均维持在较高水平,HBc Ab和HBs Ab持续阴性。结论环磷酰胺而非FK506处理可在Balb/C小鼠模型中建立HBV持续复制模型。; 黄顺梅王俊忠宋志韬王宝菊朱珍妮朱彬陆蒙吉杨东亮; 关键词：乙型肝炎病毒免疫抑制剂小鼠

中国旱獭（M.himalayana）GAPDH分子的部分cDNA克隆及序列分析被引量：1: 2014年; 目的对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析．为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础。方法根据Genbank的人GAPDHeDNA的序列设计特异性引物．以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDH cDNA序列。纯化的PCR产物连接至T载体（pMD18-T），然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH。对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定，将阳性克隆测序。对序列进行同源性以及种系进化分析。结果扩增的旱獭GAPDH序列为535bp，编码序列为533bp（nt3-335），编码177个氨基酸。获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上，其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高（99．62％），氨基酸序列同源性高达100％。构建种系进化树，分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近。结论成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列。序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近，同源性最高。; 朱彬王宝菊朱珍妮黄顺梅宋志韬李安意陶元清王忠东陆蒙吉杨东亮; 关键词：喜马拉雅旱獭甘油醛-3-磷酸脱氢酶

树鼩（Tupaia belangeri）ISG15分子全长克隆及分子生物学功能分析: 2014年; 目的对丙型病毒性肝炎（hepatitis C virus，HCV）小动物模型树嗣的干扰素刺激基因15（interferon stimulated gene15，ISG15）分子的全长eDNA序列进行克隆及分子生物学功能分析，为树晌模型在HCV感染天然免疫中的研究提供分子生物学基础。方法根据Genbank中灵长类及其他哺乳类动物ISG15分子序列保守区设计引物，使用SmarterRace方法扩增树购ISG15全长序列。在序列两端设计特异性引物，引入酶切位点，进行全长片段扩增。全长PCR产物纯化回收后连接至pMD18-T载体，构建重组质粒pMD18-T-tbISG15。对重组质粒进行酶切鉴定、测序。对序列进行同源性及种系进化，同时使用SWISSMODEL同源建模方法进行蛋白二级、三级结构预测及功能分析。结果获得树购ISG15全长序列共687bp，编码157个氨基酸。树晌ISG15与其他哺乳动物ISG15高度同源，与人的核苷酸及氨基酸序列同源性分别高达72．99％及71．34％，核苷酸及氨基酸序列进化树分析均显示树嗣种系最为接近灵长类动物。结构域分析提示：树嗣ISG15主要由两个类泛素样结构域构成。软件预测所得树购ISG15三维结构与人ISG15三维结构高度相似，且具有类泛素样三维结构，动力学检测提示本试验预测的树嗣ISG15三维结构稳定，可信度高。结论对树胸ISG15的克隆进一步完善了对树购模型的认识。为进一步在体内研究HCV感染的天然免疫机制奠定了分子生物学基础。; 夏幼辰吴珺高珊赵西平杨东亮; 关键词：树鼩丙型病毒性肝炎天然免疫

乙肝病毒感染动物模型喜马拉雅旱獭IL-15分子的克隆及序列分析被引量：1: 2014年; 目的对新近建立的乙肝病毒感染动物模型喜马拉雅旱獭的白细胞介素-15(IL-15)分子进行克隆和序列分析。方法抽提喜马拉雅旱獭脾脏总RNA,RT-PCR扩增旱獭IL-15cDNA序列,克隆至pMD18-T载体,制备重组质粒酶切、基因测序鉴定。利用软件分析旱獭IL-15与其他哺乳动物IL-15的同源性、种系亲缘关系,并预测蛋白结构。结果 RT-PCR扩增获得大小为489bp的序列,编码162个氨基酸。旱獭IL-15和土拨鼠IL-15同源性最高,和大鼠同源性最低。种系进化树结果提示旱獭IL-15与土拨鼠IL-15亲缘关系最近。旱獭IL-15蛋白构象与土拨鼠IL-15空间构象非常相似。结论克隆了喜马拉雅旱獭IL-15完整编码序列,为更好地利用新型乙肝病毒感染动物模型喜马拉雅旱獭奠定了基础。; 朱彬朱珍妮李安意杨雪晟陶元清夏幼辰黄顺梅宋志韬王忠东王宝菊陆蒙吉杨东亮; 关键词：喜马拉雅旱獭白细胞介素-15

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国家科技重大专项(2008ZX10002011)

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