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表达EBV LMP2的小鼠骨髓间充质干细胞免疫原性初讨被引量：2: 2015年; 目的贴壁法分离小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察表达EBV LMP2蛋白的小鼠MSCs(MSCs-LMP2)体内诱导特异性CTL应答效果。方法贴壁培养法分离BALB/c小鼠MSCs,流式细胞术鉴定MSCs纯度。利用携带EBV LMP2基因的非复制重组5型腺病毒(Ad5-LMP2)感染已鉴定小鼠MSCs,制备表达EBV LMP2蛋白的MSCs-LMP2。使用MSCs-LMP2肌内注射的方式免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量6×105个细胞,免疫间隔为1周,连续免疫5次。末次免疫后1周分离小鼠脾淋巴细胞,Elispot方法检测EBV LMP2特异性CTL应答。结果贴壁培养法分离、纯化的小鼠骨髓MSCs纯度可达91.8%;Ad5-LMP2感染的MSCs能很好表达LMP2蛋白,形成MSCs-LMP2,MSCs-LMP2免疫同种小鼠后,在1×106个小鼠脾淋巴细胞中,诱导产生的LMP2特异性CTL能达到323个。结论贴壁培养法能够获得纯度较高的小鼠骨髓MSCs;LMP2修饰的MSCs(MSCs-LMP2)能诱导同种小鼠产生特异性CTL应答。; 孙立莹杜海军李红霞叶树清周玲曾毅王湛; 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2 间充质干细胞细胞毒性T淋巴细胞

EBNA1在鼻咽癌发生中细胞免疫应答的研究被引量：2: 2014年; EB病毒核心抗原1（EB nuclear antigen1,EBNA1）是唯一一个在EB病毒（Epstein-Barr Virus,EBV）潜伏感染和活化状态中均表达的抗原,也是在鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma,NPC）组织中表达的几个EB病毒抗原之一.早期研究显示EBNA1为DNA结合蛋白,在促进细胞转化、EBV基因组稳定、复制、基因的表达方面起着重要的作用,并可以诱导体液免疫应答.近来研究表明在EBNAI的C末端含有CD4＋T细胞表位,在诱导细胞免疫应答方面起着重要作用,鉴此,本文对EBNA1在NPC发生中细胞免疫应答方面的研究做一综述.; 仝艳艳杜海军曾毅; 关键词：细胞免疫应答 EBNA1 癌发生 EB病毒抗原 DNA结合蛋白核心抗原

含EB病毒核抗原1重组腺病毒的构建及其在小鼠中免疫效果研究被引量：2: 2014年; 构建含EB病毒核抗原1(ebna1)重组腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并为鼻咽癌疫苗的研究提供药效学资料。PCR法扩增B95-8细胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRI和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭质粒,ebna1片段测序比对正确后,与腺病毒骨架质粒pBHG共转染293细胞。收集病变后细胞,通过流式细胞仪和Western blot检测EBNA1在293细胞中的表达。电镜下观察所获得的病毒颗粒大小,TCID50法确定重组腺病毒滴度。以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠。在免疫结束后的第1、2、4和8周检测小鼠体内EBNA1特异性细胞免疫应答的水平变化。结果显示,经PCR扩增获得约900bp ebna1目的片段,测序结果与标准株序列一致,质粒共转染293细胞后,细胞出现病变,获得含EB病毒核抗原1重组腺病毒(rAd-ebna1),流式细胞仪和Western blot检测结果证实,ebna1在细胞中正确转录表达,收获病毒二代滴度可达108 TCID50/mL。rAd-ebna1免疫小鼠后,能够激活EBNA1的CD4+T细胞特异性细胞免疫应答。本实验成功构建了含ebna1片段的重组腺病毒,并具激活CD4+T细胞免疫应答活性。; 仝艳艳李红霞张丽霞王湛周玲曾毅杜海军; 关键词：重组腺病毒疫苗

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