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上海市自然科学基金(11ZR1421000)

作品数：1 被引量：1H指数：1
相关作者：姜斌郭跃辉郭竹英李伟刘立宾更多>>
相关机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院温州医学院更多>>
发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

机构

  • 1篇温州医学院
  • 1篇上海交通大学...

作者

  • 1篇高丰厚
  • 1篇徐芒华
  • 1篇刘立宾
  • 1篇李伟
  • 1篇郭竹英
  • 1篇郭跃辉
  • 1篇姜斌

传媒

  • 1篇国际检验医学...

年份

  • 1篇2012
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
生物素标记探针-液相杂交-非变性PAGE检测非编码小RNA方法的建立和优化被引量：1
2012年
目的建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法。方法将生物素标记的sRNAU6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测。从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNAU6与miRNA145的含量。结果将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10μmol/L时达到最强。采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5μgRNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞。结论成功建立并优化了sRNA检测新方法 ,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能。
郭跃辉刘立宾徐芒华郭竹英姜斌李伟高丰厚
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