国家自然科学基金(81172587)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定
- 目的 分离培养西藏小型猪肋软骨细胞，并对其进行甲苯胺蓝染色鉴定。方法 取3日龄西藏小型猪，二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞；对所分离培养的软骨细胞进行甲苯胺蓝染色。结果 成功分离培养西藏小型猪肋软骨细胞，甲苯胺蓝染...
- 刘薇史俊文陈佩雯张婷婷唐华袁进顾为望肖东
- 关键词：西藏小型猪软骨细胞甲苯胺蓝
- 西藏小型猪肋软骨细胞的分离培养及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的分离培养西藏小型猪肋软骨细胞,并对其进行鉴定。方法实验采用3日龄西藏小型猪,二步消化法分离培养西藏小型猪肋软骨细胞(PCCs),同样的方法分离培养小鼠的肋软骨细胞(MCCs),观察两个物种软骨细胞的形态,并分别以西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)为阴性对照,对所分离培养的软骨细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定以及胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖的免疫荧光鉴定。结果成功分离培养西藏小型猪和小鼠肋软骨细胞,两种细胞的形态有差别,所分离培养的两个物种的软骨细胞均呈甲苯胺蓝染色阳性,胶原蛋白Ⅱ、蛋白聚糖免疫荧光阳性。结论成功建立了西藏小型猪肋软骨细胞分离培养及鉴定的方法。
- 刘薇史俊文岳敏张婷婷唐华袁进肖东顾为望
- 关键词：西藏小型猪软骨细胞甲苯胺蓝蛋白聚糖
- 携带Fluc和ZsGreen双报告基因小鼠iPS细胞系的建立被引量：2
- 2013年
- 背景与目的:诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)在修复受损组织器官和治疗人类疾病方面已展示了良好的应用前景,但iPS细胞具有形成畸胎瘤的作用,这是其安全应用于临床的巨大障碍之一。为此本研究拟利用慢病毒体外感染的方法,建立携带萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,ZsGreen)双报告基因的小鼠iPS细胞系,为活体动态监测畸胎瘤形成、定植和形成畸胎瘤所需最小细胞剂量等提供实验基础。方法:构建含Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。以pLH2BmRFP质粒为模板,PCR扩增获得Fluc基因片段,将其克隆至利用BamHⅠ酶切的pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen质粒中,挑选一个阳性克隆质粒进行测序,最终获得携带双报告基因的慢病毒载体pEF1a-Fluc-IRES-ZsGreen(pELZG)。采用脂质体介导的瞬时转染生产携带Fluc和ZsGreen基因的病毒,收集病毒上清,并感染iPS细胞,数天后荧光显微镜下观察是否有绿色荧光的iPS细胞克隆,不断挑取ZsGreen阳性的iPS细胞克隆以进一步纯化。将标记好的iPS细胞移植入裸鼠皮下,观察成瘤情况。结果:pELZG载体分别经XbaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ单酶切,得到的片段大小分别为10.005、3.282和6.723 kb,2.441、3.401和6.604 kb,预示成功构建了Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。利用其生产的病毒上清成功感染iPS细胞,经过不断的纯化,最终获得含稳定表达Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系。将标记好的iPS细胞植入裸鼠皮下后,观察到畸胎瘤的形成。结论:成功建立了携带Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系,为相关后续研究打下了良好的基础。标记后的iPS细胞对畸胎瘤的形成和发展具有很好的示踪作用。
- 樊全荣史俊文贾俊双高飞张余琴赵尊兰姚开泰肖东
- 关键词：萤火虫荧光素酶293T细胞诱导性多潜能干细胞畸胎瘤
- 小鼠棕色脂肪转基因过表达miR-155损坏棕色脂肪细胞的分化被引量：2
- 2019年
- 为探究microRNA-155(miR-155)对小鼠棕色脂肪组织分化的影响,收集广泛过表达miR-155的转基因小鼠(RL-m155小鼠)棕色脂肪组织,离体棕色脂肪大体拍照,然后收集部分组织固定、石蜡包埋和切片,并行HE染色,观察棕色脂肪细胞的大小和形态;同时RT-qPCR检测棕色脂肪组织中分化相关基因的表达水平。结果表明,RL-m155小鼠的体重、体型与对照小鼠无显著差异;与对照小鼠相比,RL-m155小鼠棕色脂肪组织中miR-155表达水平显著升高,而棕色脂肪组织体积及棕色脂肪细胞的大小均显著减小;棕色脂肪中特异表达基因(UCP1和SCA-1)、棕色脂肪分化调控因子(BMP2、BMP6、Smad1、Smad5、C/EBPB、MYO10和PTEN)、棕色脂肪分化诱导因子(PPARγ、PGC-1α、BMP2、BMP4、BMP7、BMPR1A和Sirt1)等棕色脂肪分化相关功能基因的mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。表明RL-m155小鼠棕色脂肪组织中miR-155过表达,导致棕色脂肪组织分化受损。
- 黎海燕刘宇廉梅陈恒伟温悦婷贾俊双林晓琳肖东
- 关键词：棕色脂肪肥胖
- 西藏小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养及借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪皮肤成纤维细胞
- 目的 分离培养西藏小型猪皮肤成纤维细胞,并借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪皮肤成纤维细胞。方法 取3日龄西藏小型猪,冷胰酶消化法分离培养西藏小型猪皮肤成纤维细胞；按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(...
- 刘薇史俊文唐华陈佩雯李静张婷婷袁进顾为望肖东
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白
- 慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望被引量：5
- 2012年
- 较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。
- 刘薇贾俊双唐华林晓琳袁进顾为望肖东
- 关键词：小型猪体细胞核移植
- 利用miR-155转基因小鼠解析miR-155在肝癌发生和糖脂代谢中的功能及机制
- 第一章 建立过表达miR-155的转基因小鼠目的:运用Cre/lox P系统建立条件性过表达miR-155的转基因小鼠。方法:以pEμ-mmu-miR155质粒(含318bp的小鼠miR-155前体序列)为模板,PCR扩...
- 林晓琳
- 关键词：MIR-155转基因小鼠纯合子肝癌发生
- 文献传递
