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原玻璃节杆菌Y1对磺胺吡啶抗药性及其生长动力学被引量：1: 2018年; 测定了原玻璃节杆菌(Arthrobacter protophormiae)Y1对磺胺吡啶(SPY)的抗药性,比较了无SPY压力不同接种量以及不同浓度SPY压力下该菌在LB培养基中的生长特性,建立了该菌不同条件下的一级生长模型,并比较其最大比生长速率(μmax)、延滞期(λ)及最大生长量(a)。结果表明,SPY对原玻璃节杆菌Y1的最小抑菌浓度为13mg/mL。SGompertz模型能较好地拟合了菌株Y1的生长曲线,拟合度较高,模型的误差较小。无SPY压力不同接种量下菌株Y1最大比生长速率(μmax=0.24830~0.29797)和最大生长量(a=2.03441~2.21512)无显著差异,但是延滞期(λ=6.12695~3.11051)随接种量增大而减小。当存在SPY压力时,最大比生长速率(μmax=0.24225~0.12034)以及延滞期(λ=4.71308~5.91191)均随着SPY浓度的提高而显著降低;当SPY浓度为3mg/mL时,菌株Y1的最大比生长速率(μmax=0.24225)和最大生物量(a=2.12467)与无SPY时相当,但其延滞期稍有降低(λ=4.71308)。; 熊明华杨芮张少飞纪磊李峰; 关键词：磺胺吡啶

一种快速经济提取革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌基因组DNA的方法被引量：13: 2016年; 细菌基因组DNA提取是分子生物学技术应用的基础,提取的DNA的质量可直接影响其结果的准确性和精确性。本研究提出了一种快速、经济的适用于多种细菌的基因组DNA提取方法,并比较了本方法与传统酚-氯仿法和试剂盒法提取3种革兰氏阴性细菌和4种革兰氏阳性细菌DNA的效果。结果显示,3种方法均可提取到较完整的基因组DNA(约23 kb)。在DNA纯度上,本法与传统酚-氯仿法无显著差异,略低于试剂盒法,但可满足PCR扩增等分子生物学技术的要求,并且其提取效率高于试剂盒法。在成本方面,本法单个样本的成本仅为试剂盒法的20%,且完成整个实验的时间仅为传统酚-氯仿法和试剂盒的50%(约60 min)。总之,本研究提出了一种快速、经济、适用于G-和G+细菌的基因组DNA提取方法,本法不仅适用于本研究中的各种细菌,对其它革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌也具有重要的潜在应用价值。; 熊明华朱继荣王光利束良佐宋运贤; 关键词：细菌基因组DNA

肠杆菌属细菌一类整合子及其基因盒特征被引量：1: 2020年; 整合子是捕获、整合和表达外源基因的重要元件,可以加速抗生素抗性基因的传播。本研究分析了已完成全基因组测序肠杆菌属细菌一类整合子及其基因盒的存在情况与特征。实验表明,目前62个肠杆菌属细菌,包括40个阴沟肠杆菌、11个霍氏肠杆菌和11个其它肠杆菌都完成了全基因组测序,其中40.32%(25/62)肠杆菌属细菌含有一类整合子。在25个含一类整合子的肠杆菌中,72%(18/25)携带一个整合子,28%(7/25)含有多个整合子。25个肠杆菌共存在36个整合子,其中88.89%(32/36)位于质粒上,其余11.11%(4/36)位于染色体上。肠杆菌属细菌一类整合子整合酶基因(1014 bp)高度保守,其中一个整合子整合酶基因发生了3碱基突变(3/1014),7个发生2碱基突变(2/1014),13个发生1碱基突变(1/1014 bp),其余没有突变。25个含一类整合子肠杆菌共存在18种基因盒,其中dfrA1基因盒频率最高16.13%(10/62),其次是aadA1(8.06%,5/62),接着是aacA27-ereA-IS1247-aac3-arr2-ereA基因盒(4.84%,3/62),其他基因盒频率低于4.0%。本研究有助于了解一类整合子在肠杆菌属细菌产生抗生素抗药性中的重要作用。; 熊明华朱继荣杨芮汪淑玉臧娜娜王昊李峰; 关键词：基因盒肠杆菌属细菌

硅基质膜核酸(DNA)纯化柱的去污染与再生被引量：2: 2015年; 为了建立一种快速硅基质膜核酸(DNA)纯化柱的去污染与再生方法,本实验先后用含低浓度Triton X-100的碱洗液和酸洗液在65℃水浴5 min处理污染纯化柱。结果表明污染纯化柱经碱(酸)相继处理后,其洗脱液中不存在凝胶电泳和PCR可检测到的微量DNA残留。处理过的纯化柱的DNA再结合能力较新纯化柱稍有提高。上述结果表明碱和酸洗液热处理在短时间内可完全去除纯化柱中污染的DNA并提高其DNA再结合能力。; 熊明华王光利朱继荣束良佐张辉唐博

淮北采煤塌陷区水体产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌流行特征分析: 2019年; 为了解淮北采煤塌陷区小型湖泊南湖中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌的流行情况及其特征,本研究采集淮北南湖水样,接种麦康凯琼脂培养基(MacConkey),利用双纸片协同增效试验确证产ESBLs肠杆菌,K-B纸片扩散法测定阳性菌株药敏性,PCR检测其基因型。结果发现15个水样中有3个产ESBLs肠杆菌(3/15, 20.0%),共获得3个非重复产ESBLs肠杆菌,分别为Escherichia spp.、Klebsiella spp.和Enterobacter spp.。这3个非重复产ESBLs肠杆菌均为多重耐药菌株,对青霉素等绝大多数β-内酰胺类和多种非β-内酰胺类抗生素耐药。这3株菌株均含CTX-M型ESBLs,其中2个表达CTX-M-9组,另一个产CTX-M-8/25组ESBLs。淮北塌陷区南湖水体流行产CTX-M型ESBLs多重耐药肠杆菌,是抗生素抗性细菌库,可能介导致病耐药菌的传播。本研究对于了解淮北采煤塌陷区水体生态健康和控制耐药菌的传播具有重要意义。; 熊明华朱继荣杨芮张辉刘远王光利李峰; 关键词：采煤塌陷区肠杆菌

一种改良的可直接用于PCR扩增的土壤DNA提取方法被引量：2: 2019年; 本研究对Zhou氏土壤DNA抽提方法进行了改良,减少了土壤用量、孵育和裂解时间,增加了土壤淋洗和硫酸铝处理步骤。接着比较了改良法和Zhou氏法抽提四种类型土壤DNA的效果。结果表明,将土壤用量减少至0.4 g、孵育和裂解时间分别降至20 min和30 min,极大地简易了操作过程,大幅节省了实验所需时间(约为Zhou氏法所需时间的一半)。裂解前增加淋洗步骤和裂解过程中加入硫酸铝都提高了DNA的纯度。前者同时提高了DNA得率,但后者稍微降低了DNA得率。与Zhou氏法相比较,改良法提取4种类型土壤(黑土,黄土,潮土,红土)的DNA在得率和纯度方面均得到提高,并且可以直接用于16S rRNA基因的PCR扩增等分子操作。总之,本改良法简便了DNA提取过程、大大节省了实验时间,可用于从不同类型土壤中抽提适合于PCR扩增等分子操作的DNA。; 熊明华曹焰晖杨芮王光利束良佐朱继荣; 关键词：DNA提取土壤

自然环境分离磺胺甲噁唑抗性细菌抗药性及其抗性基因分析: 2019年; 为了解自然环境源细菌对磺胺类抗生素的抗性特征,采用纯培养物分离技术从淮河底泥中筛选磺胺甲噁唑(SMZ)抗性细菌,测定其抗性水平,PCR扩增进一步分析其抗性基因(sul)和一类整合子(intl)。结果从该底泥样品中分离出4株SMZ抗性细菌,经鉴定分别为Arthrobacter spp.Y1、Bacillus spp.Y2、Acinetobacter spp.Y4和Bacillus spp.H。菌株对SMZ的抗性水平从低到高依次为Y4(0.5)、Y1(5)、H(10)和Y2(>10 mg/mL)。4个SMZ抗性菌株均携带sul1基因,但均不含sul3和sulA基因,其中菌株H同时携带sul2基因。菌株Y2和Y4含有一类整合子,但是菌株Y1和H不含该整合子。本研究有助于加深对自然环境源SMZ抗性细菌抗性特征及其潜在风险的认知。; 熊明华杨芮朱继荣王光利刘远张辉李峰; 关键词：磺胺甲噁唑抗生素抗性基因整合子

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安徽省自然科学基金(1408085QC47)