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检测HIV-1准种的终点有限稀释PCR技术的建立被引量：1: 2009年; 目的建立1种基于实时PCR的检测HIV-1准种的终点有限稀释PCR技术并评价其应用价值。方法采用基于第2轮实时和常规PCR的多重有限稀释巢式PCR、终点PCR及测序等技术对3例低病毒载量HIV-1感染者不同时间点PBMC中的HIV-1前病毒准种ew基因e2-v3-c3区域和gag基因p17区域进行扩增和序列测定；序列经确证后进行系统进化树分析并对氨基酸序列进行比对；用QUALITY程序计算HIV-1DNA拷贝数。结果3例患者所有随访时间点标本共进行1207个巢式实时PCR，从第二轮常规巢式PCR共获得65条c2-v3-c3准种序列、101条p17准种序列；HIV-1前病毒水平介于1．34～53．76拷贝／10。个PBMC之间。c2-v3-c3及p17核苷酸序列系统进化树分析表明，不同患者的序列分开、同一患者的序列特异聚集在一起。氨基酸序列比对分析表明，HIV-1感染早期患者体内HIV-1准种序列比较单一，随着感染时间的增加，HIV-1准种趋于复杂化。结论本研究建立的独特终点有限稀释PCR技术检测HIV-1准种灵敏度高、特异性好、高通量，可用于低水平病毒载量HIV-1感染者HIV-1准种研究。; 陈伟烈唐小平唐漾波魏绍静; 关键词：HIV-1 聚合酶链反应

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广州市重大科技攻关项目(200621E0091)