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产肠毒素大肠杆菌FaeG-mSTa-LTb-STb融合表达及其包涵体口服免疫小鼠诱导的免疫应答被引量：2: 2015年; 为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛主要结构蛋白Fae G、STa、LTb和STb毒素融合蛋白的免疫原性,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增编码Fae G-m STa(STa突变体)-LTb-STb 4种蛋白融合基因,将其克隆于p Pro EXHTa表达载体中进行原核表达。并以表达的包涵体口服免疫BALB/c小鼠,通过检测免疫鼠的体液和细胞免疫反应,评价其免疫效果。实验结果显示,融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达,并可以被特异性抗体所识别,具有良好的反应原性。免疫小鼠后均能够产生特异性Ig G和s Ig A,并诱导产生细胞免疫应答。免疫记忆反应试验证明,免疫鼠至少在3个月内保持对特异性抗原的免疫记忆应答。本研究结果表明,Fae G-m STa-LTb-STb融合蛋白具有良好的免疫原性,口服包涵体免疫是一种可行的免疫途径,提示所制备的融合蛋白作为口服疫苗抗原具有潜在的应用价值。; 赵鹏夏爽关乃瑜谷珊珊姜艳平崔文马德星葛俊伟; 关键词：产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻包涵体免疫应答

断奶仔猪源小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离鉴定及其致病性研究被引量：11: 2015年; 为研究小肠结肠炎耶尔森氏菌（Y．enterocolitica）在断奶仔猪腹泻发生中可能的致病作用，本研究采集黑龙江地区58份断奶仔猪腹泻粪便样品，经细菌分离鉴定，共分离到18株Y.enterocolitica，命名为Y1～Y18；对其6种毒力基因（all、ystA、ystB、virF、yadA和册0进行检测，结果显示，其中10株携带ystB基因，3株携带ail基因，其余5株分离株未检测到任何毒力基因。致病性试验结果显示，这些分离株的致病性存在很大差异，含有ail基因的致病性分离株Y7对小鼠和猪均具有致病性，而Y17分离株则无致病性；含有ystB基因的Y11分离株对小鼠具有致病性对猪无致病性，Y18分离株则对小鼠也无致病性；不含毒力基因的分离株Y9和Y16则可以引起小鼠和猪不同程度发病。各分离株除引起腹泻的程度、持续时间和粪便带茵天数不同以外，在肺、后肢关节液、肠系膜淋巴结和小肠内容物中的分离情况也存在差异。本研究结果表明菌株携带毒力基因的情况与其致病性并不具有明确的相关性，并且初步证明Y．enterocolitica在断奶仔猪腹泻发生过程中起到了一定的作用。; 关乃瑜夏爽赵丽丽罗继龙谷珊珊崔文葛俊伟陈洪岩; 关键词：断奶仔猪腹泻小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因

表达F4^+ETEC的靶向性乳酸杆菌活菌载体的构建被引量：2: 2015年; 为了研究M细胞靶向肽(Co1)和树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)的免疫增强作用,用实验室构建的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88ac-STa-LTB-STb-co1(KSLS-co1)的阳性质粒为模板,通过PCR的方法获得DCpep-KSLS-co1和KSLS-co1-DCpep融合基因。然后将DCpep-KSLS-co1、KSLS-co1-DCpep基因亚克隆到p PG612.1表达载体中,转化到干酪乳酸杆菌L.casei393。Western blot和间接免疫荧光分析显示,DCpep-KSLS-co1、KSLS-co1-DCpep基因在干酪乳酸杆菌中获得了表达。本试验为进一步研究M细胞靶向和树突状细胞靶向策略在乳酸菌活载体疫苗系统中应用提供物质基础。; 姜咏昊李倩葛俊伟乔薪瑗刘敏唐丽杰李一经; 关键词：干酪乳杆菌

M细胞靶向肽对FaeG抗原的免疫增强作用被引量：1: 2013年; 为研究M细胞靶向肽co1的免疫增强作用,本研究从肠产毒素性大肠杆菌(ETEC)全基因组中扩增FaeG基因,通过重叠延伸PCR的方法将人工合成的co1靶向肽编码序列连接到FaeG基因的3'端,获得FaeG-co1融合基因。并分别将FaeG和FaeG-co1基因克隆到pET-30b表达载体中,转化于大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。SDS-PAGE和western blot分析显示,FaeG和FaeG-co1基因在大肠杆菌中均获得了高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在。分别用两种重组菌表达的包涵体免疫昆明鼠,测定特异性IgG、sIgA抗体水平,并用ETEC强毒株对免疫鼠进行攻毒。结果表明,FaeG-co1重组蛋白免疫小鼠诱导机体产生的特异性IgG和sIgA抗体水平均显著高于FaeG组;FaeG-co1组两次免疫后即可对ETEC致死剂量的攻毒保护率达到100%。这些结果表明M细胞靶向肽对抗原具有免疫增强作用,是一种极具应用前景的免疫增强分子。; 高菲崔文姜艳萍唐丽杰葛俊伟李一经; 关键词：免疫增强免疫保护

产肠毒素大肠杆菌STa突变体、LTB和STb融合蛋白在乳酸菌中组成型分泌表达及其免疫原性分析被引量：1: 2017年; 为获得产肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗原STa突变体(mSTa)、LTb和STb融合蛋白在乳酸菌表达系统中组成型分泌表达,本研究将mSTa、LTb、STb三价抗原融合基因,克隆于p23启动子-USP45分泌信号肽之后,插入到乳酸乳球菌表达载体pTX8048中,构建了重组表达载体pTX-sls,将其电转化到宿主菌乳酸乳球菌L.lactisNZ9000中进行表达,应用westernblot、ELISA方法鉴定蛋白表达情况。将重组乳酸乳球菌pTX-sls/NZ9000口服免疫BALB/c小鼠,分别测定了免疫后不同时间血清中特异性IgG、粪便中特异性的sIgA水平以及血清的中和活性;采用MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测Th细胞免疫类型。结果显示,目的蛋白mSTa-LTB-STb以分泌形式组成型表达,可被阳性血清所识别。在免疫小鼠血清和粪便中均可检测到特异性IgG、sIgA,血清抗体具有一定的中和毒素作用。结果表明,该重组乳酸乳球菌具有作为口服疫苗的潜在应用价值,本研究为研制ETEC乳酸菌活载体口服疫苗奠定了基础。; 葛俊伟宋满满赵鹏夏爽关乃瑜谷珊珊崔文马德星; 关键词：产肠毒素大肠杆菌乳酸乳球菌免疫原性

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国家自然科学基金(31101845)