“十五”国家科技攻关计划(2004BA720A33-01)
- 作品数：9 被引量：35H指数：3
- 相关作者：熊承良李红钢丁晓芳周慧孔祥斌更多>>
- 相关机构：华中科技大学南京军区南京总医院华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖北省卫生厅科研基金湖北省研究与开发计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无精子症遗传学病因及其与内分泌的关系被引量：6
- 2009年
- 目的分析我国无精子症患者遗传学病因，并探讨其与生殖激素变化的关系。方法489例无精子症患者，分别用常规染色体G显带和多重聚合酶链反应进行染色体核型分析和Y染色体微缺失检测，用化学发光法测定各组血清中卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮和催乳素水平。结果489例无精子症患者中共检出染色体畸变102例，占20．86％，其中Klinefelter综合征73例，占异常总数的71．57％，其他性染色体异常13例（占12．75％），常染色体异常16例（占15．69％）。有58例（11．86％）发生Y染色体微缺失，各区发生率构成比由高到低依次为：AZFc区37例（占63．8％），AZFb＋C区11例（占19．0％），AZFa＋b＋C区6例（占10．3％），AZFa、AZFb区各2例（各占3．4％）。无精子症患者与正常生育人群比较，卵泡刺激素、黄体生成素显著升高，睾酮值降低，其差异有统计学意义（P〈0．01）；尤其是Klinefeher综合征及Y染色体AZFa＋b＋C区缺失组激素水平变化显著，与其他无精子症患者相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论染色体异常及Y染色体微缺失在我国的发生情况与其他国家大多数报道基本一致，其中，Klinefelter综合征及Y染色体AZFa＋b＋C区缺失对内分泌造成严重影响。
- 周慧朱继望李红钢唐艳平
- 关键词：无精子症Y染色体微缺失核型分析生殖激素
- 异丙苯过氧化氢体内致大鼠睾丸和附睾过氧化的初步研究被引量：3
- 2006年
- 目的:建立异丙苯过氧化氢(cHP)体内过氧化模型,探讨cHP体内过氧化对大鼠睾丸组织和附睾精子的影响,及对精子核DNA断裂的影响。方法:90日龄雄性W istar大鼠52只,设cHP 1/10 LD50、1/6 LD50、1/4 LD503个剂量组和对照组,cHP 1/10 LD50、1/6 LD50组和对照组每组大鼠12只,1/4 LD50组大鼠16只。用无菌生理盐水稀释70%cHP水剂配制,按2 m l/kg经腹腔每日1次注射,对照组给同体积生理盐水,观察一般中毒症状和体征。连续1周,最后1次给药24 h后处死动物。分光光度法测定睾丸组织匀浆、附睾头部和尾部精子丙二醛含量,用单细胞凝胶电泳检测睾丸生精上皮细胞、附睾头部和尾部精子核DNA断裂发生率,计数附睾尾部精子活动率,睾丸和附睾常规石蜡切片,苏木精-伊红染色观察病理变化。结果:给予cHP大鼠活动稍差,无死亡,1/6 LD50、1/4 LD50 cHP组体重降低明显(P<0.001)。1/6 LD50、1/4 LD50 cHP组大鼠睾丸和附睾精子丙二醛浓度均明显高于对照组,附睾尾部精子活动率均明显降低,睾丸生精上皮细胞和附睾头部精子核DNA断裂发生率明显高于对照组,附睾尾部精子核DNA断裂的发生率与对照组差异无显著性(P>0.05)。1/10 LD50 cHP组大鼠体重变化、睾丸丙二醛浓度、附睾尾部精子活动率、睾丸生精上皮细胞和附睾精子核DNA断裂与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:1/6 LD50、1/4 LD50 cHP能在体内使大鼠睾丸和附睾精子发生过氧化,并使细胞核DNA发生断裂,核DNA断裂的主要部位可能在睾丸组织,对附睾尾部精子核DNA断裂无明显影响。
- 李红钢廖爱华李双胡廉熊承良
- 关键词：睾丸精子过氧化损伤
- CatSper1在小鼠睾丸发育过程中的动态表达及与人精子活力的关系被引量：6
- 2007年
- 目的研究CatSper1 mRNA在小鼠睾丸发育过程中的动态变化,并探讨CatSper1蛋白表达与精子运动的关系。方法采用荧光实时逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)相对定量法检测CatSper1 mRNA在出生后11、15、18、21、25、28、35、42、56和120 d龄C57BL/6小鼠(每天龄3只)睾丸中的表达;分别从4例正常精液标本中用四层密度梯度Percoll(浓度分别为95%、76%、57%和47.5%)离心分离出高活力和低活力精子,用于Western Blot定量检测CatSper1蛋白的表达。结果CatSper1 mRNA在18 d龄小鼠睾丸开始表达,在25和28 d龄表达上调明显,分别为21 d龄表达水平的2.95和7.59倍。自42 d后上调缓慢,至成年小鼠时达到最高水平。CatSper1蛋白在每例标本高活力精子中的表达量均显著高于低活力精子(P<0.05)。结论CatSper1与精子活力特性有关,为进一步研究CatSper家族各成员间的关系和确切功能提供参考依据。
- 李红钢丁晓芳孔祥斌熊承良
- 关键词：钙离子通道睾丸发育生物学精子
- 545例无精和严重少精子症Y染色体微缺失情况及位点分析
- Y 染色体微缺失已被证实为致男性不育的遗传学病因之一,是造成约10%无精子症和严重少精子症(<5×10/ml)患者不育的病因,近期研究还表明与习惯性流产有关;而且这种遗传缺陷可以 100%遗传给男性子代,导致子代不育,特...
- 李红钢左明达熊承良
- 文献传递
- 人精子核完全裂解对RNA提取的影响
- 2008年
- 目的证实提取人精子RNA时，精子核完全裂解的重要性。方法人精子液化后经Percoll纯化，淋巴细胞分离液分离外周血白细胞用作对照。人精子和外周血白细胞RNA均用TRIzol和RNeasy Kit两种试剂提取，对于不同试剂提取的RNA，取相同细胞数的RNA用于逆转录，并用实时PCR检测两种提取方法的β-ACTIN mRNA量，来反映所提取RNA的量。结果RNeasy Kit能完全裂解人精子和外周血白细胞的细胞核，TRIzol能完全裂解外周血白细胞的细胞核，但不能完全裂解人精子核。对于人精子，RNeasy Kit和TRIzol提取RNA量分别为（149．8±24．5）和（35．3±4．0）ng／106精子（n=3），差异有统计学意义（P=0．01）。而且这种差异不是由于提取试剂的提取效率造成的，因为对于外周血白细胞，RNeasy Kit提取RNA量还稍低于TRIzol[（765．5±229．8）和（958．8±201．0）ng／10^6细胞，n=3，P=0．168]。结论人精子核的完全裂解可显著增加精子RNA提取量，也间接说明精子核是人精子RNA存在的重要部位。
- 李红钢丁晓芳熊承良
- 关键词：精子RNA实时聚合酶链反应
- 尿激酶在雄性生殖中的作用被引量：3
- 2006年
- 尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)存在于许多动物的生殖系统,在雄性生殖系统精子和精浆中都可以检测到。关于uPA的作用机制尚未完全阐明,目前多数学者认为uPA是通过与uPA受体结合而发挥作用。在雄性生殖系统,uPA的生理作用是多方面的,它参与精子发生、成熟、运动、获能、顶体反应、受精以及精液液化等生殖生理过程。现就uPA在此方面的研究进展作一综述。
- 明钰熊承良
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活因子生殖精子雄性
- 无精子症患者精液Y染色体微缺失检测与分析被引量：3
- 2008年
- 目的建立用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查的简便方法，并用于检测我国无精子症患者Y染色体微缺失的发生情况和位点。方法无精子症患者241例，取精液标本（其中51例有血液标本），45例正常精液标本作为对照，快速裂解提取DNA，用4组多重PCR检测分布于AZFa、AZFb、AZFc区共15个序列标签位点（STS）的缺失。PCR产物测序证实无精子症患者精液为模板扩增的准确性，琼脂糖凝胶电泳观察精液标本和相应血液标本PCR产物的一致性。结果所有多重PCR反应均成功进行，产物测序证实为目的片段。正常精液未检测到Y染色体微缺失，而无精子症患者共检测到26例（10．8％）Y染色体微缺失，均有欧洲男科学会（EAA）和欧洲分子遗传学质量控制体系（EMQN）推荐STS位点的缺失：AZFa区、AZFb区各2例（各占7．7％），3例（11．5％）位于AZFb＋AZFc区，19例（73．1％）位于AZFc区。血液标本检测结果与精液标本检测结果完全一致。结论用无精子症患者精液进行Y染色体微缺失检查是可行、可靠的。初步表明EAA／EMQN推荐STS位点适合我国无精子症患者Y染色体微缺失检查。
- 李红钢丁晓芳王成赵江霞左明达熊承良
- 关键词：无精子症精液聚合酶链反应Y染色体微缺失
- 人精子RNA的提取及含量分析被引量：10
- 2008年
- 目的建立可靠的提取人精子RNA的方法，分析其含量并用于检测基因mRNA。方法9例正常精液标本液化后，经Percoll纯化，用体细胞裂解液（含0．1％十二烷基硫酸钠和0．5％Triton X-100的水溶液）于O℃处理15min去除精子以外的细胞。用RNeasy Kit提取精子RNA，微量核酸测定仪测定RNA量。RNA用于逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR），检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2（CatSper2）、鱼精蛋白2（Protamine-2）mRNA，同时，检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白（E-Cadherin）mRNA，分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染。结果体细胞裂解液于0℃处理15min能去除精子以外的细胞，使精子RNA提取量提高（2．2～4.9倍）。9例正常精液标本RNA量为（233．5±75．3）ng／10^6精子。所有标本RNA用RTPCR，均成功扩增β-Actin、CatSper2、Pmtamine-2，但扩增c-Kit、CD4、E-Cadhefin未见目的条带。结论人精子中含微量RNA，本提取方法能提取人精子中微量RNA，且避免其他细胞污染，可供人精子RNA研究和临床检测选用。
- 李红钢周慧官黄涛丁晓芳熊承良
- 关键词：精子RNA
- 尿激酶型纤溶酶原激活因子对雄性大鼠生育力影响的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）对于奥硝唑所致的雄性不育大鼠生育力的影响。方法：10～12周龄成年雄性SD大鼠50只，随机分成5组，每组10只：奥硝唑模型组、uPA高剂量组、中剂量组、低剂量组和空白对照组。奥硝唑模型组和uPA各剂量组给予奥硝唑400mg／（kg·d）灌胃，同时uPA高剂量组、中剂量组、低剂量组分别腹腔注射uPA3000IU／（kg·d）、1000IU／（kg·d）、334IU／（kg·d）。空白对照组给予等体积0．5％羧甲基纤维素钠灌胃，同时腹腔注射等量生理盐水。各组动物连续处理20d后，观察动物的精液常规、睾丸和附睾功能以及与雌鼠交配情况。结果：①与空白对照组相比，奥硝唑模型组精子活动力和平均胚胎数显著降低（P〈0．01）。②与模型组相比，uPA高剂量组精子活动力和平均胚胎数显著增加（P〈0．01），而uPA中、低剂量组虽有所改善但无统计学意义。③uPA高剂量组精子日产量与模型组及空白对照组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论：uPA对奥硝唑引起的雄性大鼠不育起到改善作用。
- 明钰商学军熊承良庞雪冰熊芬
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活因子精子活动力生育力雄性
- 用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA被引量：2
- 2007年
- 目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。
- 李红钢廖爱华孔祥斌胡廉熊承良
- 关键词：精子MRNA小鼠
