广东省自然科学基金(07300247)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 血管内皮生长因子对人骨髓基质细胞增殖的影响及其形态学观察被引量：2
- 2008年
- 目的了解血管内皮生长因子（VEGF）基因对体外生长的人骨髓基质干细胞（hBMSCs）增殖以及组织学形态的影响。方法实验用骨髓取自早产死胎，采用全骨髓法培养。原代培养至第8～10天后传代培养。实验分为三组：VEGF和绿色荧光蛋白（GFP）基因转染hBMSCs组、空腺病毒载体转染hBMSCs组以及空白hBMSCs组。相差显微镜和光镜下进行HE染色组织学观察细胞生长形态变化。进行MTT检测，流式细胞仪分析细胞周期。结果倒置相差显微镜和HE染色后光镜下观察，三组细胞外形无明显差异，形态基本一致。随培养时间的延长，各组细胞数量都有所增加，各时间点经VEGF基因转染的hBMSCs吸光度值差异无统计学意义（P〉0．05）。转染VEGF基因的hBMSCs与转染空载体、未转染的hBMSCs相比较，DNA合成前期细胞所占百分比差异无统计学意义，反应增殖活力的增殖指数PrI（包括DNA合成期、DNA合成后期和有丝分裂期）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论转染VEGF对hBMSCs体外增殖和形态无明显影响。
- 陈滨宋艳斌裴国献
- 关键词：骨髓细胞血管内皮生长因子细胞增殖
- 多西他赛与放疗联合对食管癌放射增敏的疗效观察被引量：4
- 2010年
- 目的研究和评价多西他赛与放疗联合对治疗食管癌放射增敏的疗效和不良反应。方法放疗使用直线加速器6 MV或15 MVX线常规分割法,放疗增敏组应用多西他赛40 mg/周(于放疗开始的第1、8、15、22、29、36天连用6次)。结果单独放疗组有效率为59%,放疗增敏组有效率为86.36%(P<0.05)。结论多西他赛具有放疗增敏作用,能够提高食管癌的完全缓解和局部控制率。
- 陈丽陈滨
- 关键词：食管肿瘤多西他赛
- 细菌内重组法快速构建血管内皮生长因子165重组腺病毒载体被引量：2
- 2009年
- 背景:腺病毒载体具有在哺乳动物及其多种细胞基因转移和蛋白表达的高效性,目前以细菌内重组法构建病毒载体成为常用方法。目的:观察以细菌内重组法构建血管内皮生长因子165重组腺病毒载体的可行性。设计、时间及地点:基因转染病毒载体的单一样本实验,于2007-10/2008-02在中山大学分子生物实验室完成。材料:合成血管内皮生长因子165基因的引物合成和序列测定由上海生工公司提供。pDNR-1r质粒(已含有绿色荧光蛋白基因)、pInt.AV.spaT质粒、pInt.B.B质粒均购自广州拓普基因技术公司。方法:通过动态模板PCR基因合成法合成的血管内皮生长因子165基因克隆入pMD18-T载体获得pMD18-T-VEGF165。将pMD18-T-VEGF165和pDNR经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,构建pDNR-VEGF165载体,酶切鉴定后,pDNR-VEGF165与pInt.AV1.spat共转化BNN菌株的感受态细胞,构建pInt.AV1.spat.VEGF165腺病毒表达载体,将线性化的pInt.AV1.SpaT-VEGF165和pInt.B.B转染293细胞。主要观察指标:以DNA测序、酶切及聚合酶链反应法鉴定重组质粒和病毒,并测定重组腺病毒的感染效率。结果:重组质粒用EcoRⅠ酶切后,切成2条片段,大小约为1kb和6.9kb,实际的酶切分析结果与理论分析相符,证明转化子中的重组质粒为Cre-LoxP系统介导的含有血管内皮生长因子165基因的重组质粒。荧光显微镜下,8h后即可见部分细胞发出荧光,24h发荧光的细胞数及强度达到高峰,转染率超过80%。线性化的pInt.AV1.SpaT-VEGF165和pInt.B.B共转染293细胞,12～14d后会出现细胞病变效应。分别提取病变293细胞、正常293细胞的DNA,PCR后,1%琼脂糖凝胶电泳,病变的293细胞在约500bp处出现条带。结论:以细菌内重组法获得了含有成熟血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒。
- 陈丽陈滨宋艳斌
- 关键词：腺病毒载体血管内皮生长因子165
- 金因肽、贯新克联合防治放射性口腔黏膜损伤的疗效观察
- 2010年
- 放射治疗是治疗头颈部肿瘤的主要手段。口腔黏膜反应是头颈部恶性肿瘤放射治疗最常见的副反应，表现为充血、斑点状黏膜炎，甚至溃疡形成、疼痛难忍，严重者造成放疗中断或中止放疗，使肿瘤组织再增殖。我科采用金因肽、贯新克含漱预防治疗放射性口腔炎，取得较好疗效，现报道如下。
- 陈丽陈滨
- 关键词：金因肽放射性口腔黏膜损伤
- 腺病毒介导VEGF基因在人骨髓基质干细胞中的表达被引量：3
- 2008年
- [目的]体外培养人骨髓基质干细胞(hBMSc),将VEGF165基因腺病毒载体共转染hBMSc,观察其表达。[方法]共转染实验分为3组:VEGF165和eGFP转染组、空腺病毒载体转染组和未转染组。取重组腺病毒Ad-VEGF165(MOI=20pfu/cell)感染hBMSe。荧光显微镜下观察eGFP的表达,判断感染效率及细胞生长情况,RT-PCR检测,ELISA和Western blot检测分别用于观察基因转染的表达。[结果]MOI=20pfu的转染率已达80%以上,取此值为转染滴度。提取出的总RNA质量较好。以双链cDNA为模板扩增VEGF165基因,产物经1%琼脂糖凝胶电泳,均可见到549bp(GAPDH)2条带。转染组可见VEGF165表达,空载体组和空白对照组未检测到VEGF165表达。ELISA结果显示基因转染组与转染空载体组和未转染组结果差异呈显著性(P<0.05)。Western blot显示:转染组在50KD处出现特征性条带,而空载体组和空白对照组未见条带。[结论]外源性VEGF基因在人骨髓基质干细胞(hBMSc)内获得稳定表达,在本实验条件下培养的hBMSc具有典型成骨细胞的形态学特征和较强的生物学活性,向成骨细胞方向分化效率较高,细胞数量可以满足骨组织工程研究的要求。
- 陈滨宋艳斌李玉华裴国献
- 关键词：骨髓基质干细胞VEGF绿色荧光蛋白基因转染
- 血管内皮生长因子基因对人骨髓基质细胞增殖及代谢的影响
- 2008年
- 目的观察血管内皮生长因子(VEGF)基因对人骨髓基质细胞(hBMSc)增殖、代谢的影响。方法实验分为3组:①VEGF165和eGFP基因转染hBMSc组;②空腺病毒载体转染hBMSc组;③单纯hBMSc组。培养细胞,进行MTT检测,流式细胞仪分析细胞周期。取各组生长状态良好的第3代细胞,转染后,进行ALP含量检测,骨钙蛋白和层粘连蛋白检测。结果各组细胞数量随培养时间的延长都有所增加,各时间点经VEGF165基因转染的hBMSc吸光度值无显著性差异(P>0.05)。经转染基因的hBMSc与转染空载体、未转染的hBMSc相比较,DNA合成前期细胞所占百分比无显著性差异,反应增殖活力的增殖指数PrI(包括DNA合成期、DNA合成后期和有丝分裂期)也无显著性差异(P>0.05)。经转染的hBMSc碱性磷酸酶、骨钙蛋白和层粘连蛋白合成与转染空载体、未转染的hBMSc相比较有显著性差异(P<0.05),证实经转染的hBMSc碱性磷酸酶、骨钙蛋白和层粘连蛋白合成明显高于其他两组。结论本实验证实了构建的Ad-VEGF165感染哺乳动物细胞后具有分泌VEGF165的能力,并获得了转VEGF165基因hBMSc。转染VEGF165对hBMSc体外增殖明显影响,同时可以显著提高BMSc分泌ALP,骨钙素(OC)和层粘连蛋白(LN),说明VEGF165对hBMSc体外向成骨细胞分化起到了促进作用。
- 陈滨宋艳斌李玉华裴国献
- 关键词：骨髓基质干细胞血管内皮生长因子细胞培养代谢
