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国家卫生部科学研究基金(WKJ2005-2-030)

作品数：1 被引量：2H指数：1
相关作者：程言博钱进军杨亚萍刘春风刘康永更多>>
相关机构：苏州大学附属第二医院更多>>
发文基金：国家卫生部科学研究基金更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇转染
  • 1篇稳定转染
  • 1篇细胞
  • 1篇核表达
  • 1篇Α-SYNU...
  • 1篇PC12细胞
  • 1篇SNCA

机构

  • 1篇苏州大学附属...

作者

  • 1篇刘康永
  • 1篇刘春风
  • 1篇杨亚萍
  • 1篇钱进军
  • 1篇程言博

传媒

  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2008
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达被引量：2
2008年
目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-synu-clein(SNCA)的单克隆PC12细胞株。方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序。在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR I、BamHI两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定。以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株。结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功。RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达。结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53Tα-synuclein的单克隆PC12细胞株。
钱进军程言博刘春风杨亚萍刘康永
关键词：稳定转染PC12细胞
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