北京市优秀人才培养资助(20071D0501800253)
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 相关作者：郑君芳贺俊崎王小柱陈鹏刘华更多>>
- 相关机构：首都医科大学山东省眼科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- EBP50影响HeLa细胞微丝骨架的分布和定位被引量：4
- 2008年
- 目的:通过研究与膜-细胞骨架连接蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族相结合的磷酸化蛋白50(ERM-binding phospho-protein-50,EBP50)对HeLa细胞微丝骨架含量、分布的影响及受血小板源性生长因子PDGF(platelet-derived growth factor)刺激后,微丝骨架在细胞中定位的变化及微丝骨架定位变化与EBP50的关系,阐明EBP50蛋白影响肿瘤细胞生长迁移的分子机制。方法:将pBK-CMV-HA空载体和pBK-CMV-HA-EBP50wt重组质粒分别转染HeLa细胞系,G418进行稳定表达细胞系的筛选,并用Western免疫印迹方法进行蛋白表达的鉴定;利用Western免疫印迹、免疫荧光细胞化学染色等方法结合光镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观察和分析HA-HeLa与HA-EBP50-HeLa微丝骨架的含量及分布的异同;然后使用10ng/ml和20ng/mlPDGF37℃刺激细胞15min后,分别观察及分析两组细胞微丝骨架的分布情况及EBP50在细胞中定位的变化。结果:Western免疫印迹鉴定证实转染的外源性EBP50cDNA片段可在HeLa细胞系中成功表达EBP50蛋白,证明获得稳定表达EBP50蛋白的HeLa细胞系。Western免疫印迹及免疫荧光结果证实,转染空载pBK-CMV-HA的HeLa细胞微丝骨架粗大疏松,方向不一,交错排列;与其相比,EBP50虽然对HeLa细胞微丝骨架的含量没有明显影响,但能够促使细胞微丝骨架呈致密细丝状,平行规则排列,并沿细胞极性分布;并且在PDGF刺激下,EBP50能够与微丝骨架一起自胞浆迁移至膜上,并共定位。结论:EBP50能改变HeLa细胞微丝骨架的分布。在受到PDGF刺激时,EBP50还能使HeLa细胞系的微丝骨架定位于膜表面。EPB50可能通过影响微丝骨架的分布和定位来发挥其影响肿瘤细胞生长迁移的功能。
- 郑君芳王瑛陈鹏贺俊崎
- 关键词：微丝骨架HELA细胞EBP50
- 恐惧记忆相关蛋白的蛋白质组学研究被引量：4
- 2010年
- 应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定和数据库检索,分析比较了CD1和C57BL/6J小鼠经条件性恐惧实验后海马蛋白表达的差异,探讨了与恐惧记忆相关的蛋白质.CD1和C57BL/6J小鼠经条件性恐惧实验后,海马蛋白表达存在明显差异,29种蛋白(31个蛋白点)与恐惧记忆的形成显著相关.其中24个蛋白点表达显著上调,7个蛋白点显著下调.与恐惧记忆相关的蛋白按功能可分为如下6类:(1)能量代谢或线粒体功能相关蛋白;(2)神经发育相关蛋白;(3)信号转导相关蛋白;(4)细胞骨架相关蛋白;(5)氨基酸代谢和蛋白分解相关蛋白;(6)伴侣蛋白.这些恐惧记忆形成的相关蛋白深化了对恐惧记忆脑机制的认识,为研究和治疗认知相关疾病提供了新靶标.
- 郑君芳刘华熊英王小柱贺俊崎
- 关键词：海马蛋白质组学质谱
- EBP50抑制HeLa细胞增殖及基质金属蛋白酶表达
- 2009年
- 郑君芳刘琨马桂伶陈鹏贺俊崎
- 关键词：HELA细胞增殖基质金属蛋白酶蛋白酶表达MMP-9EB细胞迁移
- 磷酸化蛋白50(EBP50)——一种新的抑癌蛋白被引量：7
- 2008年
- 磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50,EBP50)是由358个氨基酸组成的多功能连接蛋白.EBP50通过其PDZ-Ⅰ、PDZ-Ⅱ和ERM结合结构域与多种蛋白质结合,对PI3K/Akt、PLCβ等生长信号途径及对细胞迁移进行调控.目前有很多证据提示,ebp50是一种新的抑癌基因.在乳腺癌病人临床标本和细胞系中可检测到ebp50基因的杂合性丢失(LOH)和突变,其抑癌作用可能是通过它与多种抑癌蛋白(如抑癌蛋白PTEN、MERLIN和SYK)的相互作用并增强它们的稳定性,并与致癌蛋白结合从而抑制其致癌功能来达到的.通过对其分子结构、调控的信号途径及其与乳腺癌发生、发展的关系进行综述,为乳腺癌的防治提供新线索.
- 郑君芳贺俊崎
- 关键词：抑癌蛋白
- 空间记忆相关蛋白的蛋白质组学研究被引量：2
- 2010年
- C57BL/6J小鼠在评价空间记忆的多T迷宫(MTM)和Barnes迷宫(BM)中表现不同,本研究拟寻找导致这种行为差异的海马蛋白.应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定和数据库检索,分析比较经两种迷宫训练测试后小鼠海马蛋白水平的不同,发现经过BM和MTM训练的小鼠有29种蛋白表达存在明显差异.其中,在BM训练组中5种蛋白表达上调,而在MTM组中24种蛋白表达上调.与空间记忆相关的蛋白按功能可分为如下6类:(1)能量代谢相关蛋白;(2)细胞骨架相关蛋白;(3)分子伴侣;(4)神经发育相关蛋白;(5)转录因子和蛋白合成相关蛋白;(6)信号转导蛋白.本研究结果丰富了空间记忆的机制,对于神经科学的进一步发展具有启发意义.
- 郑君芳孙超渊孙丽翠杨晓梅王小柱黄艳李洋贺俊崎
- 关键词：蛋白质组学空间记忆质谱
- 嗅觉记忆相关蛋白的蛋白质组学研究被引量：2
- 2010年
- 应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定和数据库检索,分析比较了C57BL/6J小鼠在嗅觉训练和记忆测试后嗅球蛋白表达的差异,探讨了与嗅觉记忆相关的蛋白质.C57BL/6J小鼠经嗅觉训练后,可对相应的气味保持记忆能力,其嗅球蛋白表达存在明显差异,5种蛋白与嗅觉记忆形成显著相关.上述蛋白功能涉及神经发育、信号转导及细胞骨架和核苷酸代谢,其中神经发育和信号转导相关蛋白表达上调,而细胞骨架和核苷酸代谢相关蛋白表达水平降低.这些与嗅觉记忆形成相关的蛋白深化了对嗅觉记忆机制的认识,为研究和治疗认知相关疾病提供了新靶标.
- 郑君芳华琳张秋霞李德龙贺俊崎
- 关键词：蛋白质组学质谱
- 用于酵母双杂交的EBP50诱饵载体的构建和鉴定
- 2008年
- 构建用于酵母双杂交系统的结合域(binding domain,BD)诱饵载体pGBKT7-EBPS0,并检测其是否具有自身激活作用。方法:用PCR方法从pBK-CMV-HA-EBP50质粒中扩增出EBP50全长,引入酶切位点EcoR I、BamH I,与pGBKT7载体连接起来,并检测pGBKT7-EBP50在酵母双杂交系统中的自激活作用。结果:成功构建了BD诱饵载体pGBKT7-EBP50,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活作用。结论:pGBKT7-EBP50可用于筛选和鉴定新的与其相互作用的蛋白,从而有助于进一步研究EBP50在体内的功能。
- 郑君芳杨荟敏张红
- 关键词：诱饵载体自激活作用
