国家自然科学基金(30771862)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学北京大学更多>>
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- 克山病发病与谷胱甘肽过氧化物酶-1基因多态性的关系研究被引量：6
- 2010年
- 目的 研究谷胱甘肽过氧化物酶-1（GPx-1）基因多态性与血硒、GPx-1酶活性的关系,为克山病个体的易感性提供分子遗传学基础.方法 采用分光光度法及酶促法测量71例克山病患者和290名对照（其中内对照78名,外对照212名）的全血硒和GPx-1酶活性,采用测序及聚合酶链反应-限制性内切酶长度多态性（PCR-RFLP）方法分析GPx-1基因198位点基因型,采用新生乳鼠心肌细胞转染表达质粒,探讨GPx-1两种基因型的功能.结果 克山病患者的血硒为（0.8±0.2）μmol/L,内对照组为（0.9±0.2）μmol/L,外对照组为（1.2±0.2）μmol/L（F=4.888,P＜0.001）.克山病患者的GPx-1酶活性为（73.0±12.6）×10-10U/RBC,内对照组为（80.9±9.2）×10-10U/RBC,外对照组为（115.8±21.1）×10-10U/RBC（F=5.324,P＜0.001）.克山病患者较对照组均明显降低.GPx-1基因上筛查出突变198位点多态性Pro198Leu;克山病患者的Pro198Leu多态性频率为21.1%,对照组的多态性频率为10.7%,病例组的多态性频率明显升高（x2=5.588,P=0.018）.突变型组（Pro198Leu和Leu198Leu）的血硒为（0.9±0.2）μmol/L,非突变型为（1.1±0.3）μmol/L（t=3.183,P＜0.01）;突变型组的酶活性为（86.1±23.0）×10-10U/RBC,非突变型组的酶活性为（101.8±25.9）×10-10U/RBC（t=5.784,P＜0.01）.进一步研究证实198位等位基因多态性与低硒之间存在协同倍增交互作用.在大鼠乳鼠心肌细胞上过表达GPx-1（198Leu）会降低30%的GPx-1酶活性,并且对添加硒的反应不敏感.结论 低硒并GPx-1基因198Leu多态性,与GPx-1酶活力降低有关;低硒和GPx-1-198Leu存在协同倍增交互作用,共同增加克山病发病风险.
- 雷聪牛小麟魏瑾朱建宏朱毅
- 关键词：克山病硒谷胱甘肽过氧化酶多态性单核苷酸疾病影响状态调查
- 慢型克山病患者血清蛋白质双向凝胶电泳图谱分析被引量：2
- 2013年
- 目的分析克山病(KD)患者差异表达的血清蛋白质。方法以慢型KD和正常血清标本为研究对象,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离KD和健康人血清蛋白质,银染显色,PowerLook2100XL扫描仪(Umax)透射扫描获取图像,ImageMaster 2DPlatinum 5.0软件分析图像。并通过与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,推测KD相关的差异蛋白。结果建立了稳定的慢型KD和健康人血清蛋白质2-DE图谱,分别检测到808和814个蛋白质点,匹配率96.5475%。软件分析显示2组样本共有44个差异蛋白质点,11个仅在KD组血清中表达,12个仅在正常血清组出现,21个为共有蛋白但在表达量上存在差异(KD组14个上调、7个下调,差异倍数≥3倍,P<0.01)。将差异蛋白与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,在匹配值范围内出现的353个蛋白中,仅比对出KD2-DE图谱胶内编号为1177的蛋白点在属性上与数据库中的P02774 2-D0004T6名为维生素D结合蛋白(VDBP)匹配度最高,推测编号为1177的差异蛋白是VDBP。结论 KD患者与正常人血清蛋白质组存在明显差异。推测VDBP可能通过炎症免疫反应途径参与了KD的心肌损伤。
- 孙玉晓朱延河朱建宏牛小麟阎超杨光林琳
- 关键词：克山病血清蛋白质组学
- 低硒大鼠心肌线粒体硫氧还蛋白2的动态表达和心肌的损伤情况被引量：3
- 2012年
- 目的:检测低硒大鼠心肌线粒体中硫氧还蛋白2(thioredoxin 2,Trx2)的蛋白表达水平,观察在体心功能及心肌细胞凋亡情况,分析Trx2与心功能及心肌细胞凋亡指数之间的相关性,探讨Trx2在心肌损伤中的作用。方法:构建低硒大鼠模型,以常硒组为对照,分别于喂养20周、30周和40周时颈动脉插管测其心功能;提取心肌线粒体,Western blotting法检测线粒体中Trx2的表达水平;免疫组织化学技术(SP法)对Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)进行原位染色,衡量心肌细胞凋亡情况。结果:(1)各时点对照组大鼠心肌线粒体Trx2的表达无明显差异,低硒组与相应时点的对照组相比Trx2表达均降低,且随低硒喂养时间延长降低更为明显,差异显著(P<0.05);(2)与对照组相比,低硒组大鼠心脏收缩及舒张功能均降低,以收缩功能指标——左室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)和左心室内压最大上升速率(maximum rate of left ventricular pressure rise,+dp/dtmax)降低更为明显(P<0.05);免疫组化染色显示,随着喂养时间的延长,低硒组大鼠心肌细胞凋亡加重;(3)相关性分析显示,Trx2与LVSP和+dp/dtmax呈正相关,与心肌细胞凋亡指数呈负相关(P<0.01)。结论:低硒可通过影响大鼠心肌线粒体中Trx2蛋白的表达,参与心脏功能减退和心肌细胞凋亡;线粒体Trx2对心肌细胞具有保护作用。
- 潘晓青魏瑾张明林琳单虎闫蕊贺乐
- 关键词：心肌线粒体心功能细胞凋亡
- 低硒大鼠心肌线粒体CytC含量的动态变化及其在心肌细胞凋亡中的作用被引量：9
- 2013年
- 目的检测低硒大鼠心肌线粒体中细胞色素C(CytC)的蛋白含量及心肌细胞凋亡情况,探讨低硒时CytC在线粒体介导的细胞凋亡中的作用机制。方法构建低硒大鼠模型,于喂养20、30、40周时提取心肌线粒体,Western Blot法检测线粒体中CytC的蛋白表达;免疫组织化学技术(SP法)对死亡结构域蛋白FADD进行原位染色,统计阳性细胞指数,并对CytC与心肌细胞凋亡指数进行相关性分析。结果低硒组CytC的表达与相应时段的对照组相比均降低,且随低硒喂养时间延长,降低更为明显,差异均有统计学意义(P<0.05);各时间对照组间心肌线粒体中CytC的表达无明显差异;免疫组化染色显示,随着喂养时间的延长,低硒组大鼠心肌细胞凋亡加重;相关性分析显示,线粒体内CytC表达与心肌细胞凋亡指数呈负相关(rs=-0.858,P<0.01)。结论低硒可影响大鼠心肌线粒体中CytC蛋白的表达;CytC表达与心肌细胞凋亡指数具有相关性,提示CytC在线粒体介导的心肌细胞凋亡中起重要作用。
- 潘晓青魏瑾林琳张明单虎闫蕊贺乐
- 关键词：心肌线粒体细胞色素C凋亡低硒心肌细胞凋亡
- 衔接蛋白p66shc在雌激素抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡中的作用
- 2014年
- 目的探讨衔接蛋白p66shc在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡中的作用及雌激素的干预影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,将心肌细胞分为5组:正常对照组、10-11 mol/L AngⅡ组、10-9 mol/L AngⅡ组、10-7 mol/L AngⅡ组、10-7 mol/L AngⅡ+雌二醇组;经药物干预后应用MTT法测定细胞存活率、流式细胞仪测定活性氧含量和细胞凋亡率、荧光酶标仪检测线粒体膜电位水平、Western blot检测p66shc和磷酸化(pp66shc)蛋白的表达水平。结果随着AngⅡ浓度的升高,心肌细胞存活率和线粒体膜电位水平逐渐下降,而细胞内活性氧含量和凋亡率逐渐升高(P<0.05);且雌激素预处理可减轻AngⅡ对心肌细胞的损伤(P<0.05)。AngⅡ可使心肌细胞内p-p66shc和线粒体内的p66shc的表达呈剂量依赖性升高(P<0.05),雌激素预处理可减弱AngⅡ对细胞内p-p66shc和线粒体内p66shc表达水平的影响(P<0.05)。结论 p66shc参与了AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡反应,且雌激素可通过下调线粒体内p66shc的表达而减轻AngⅡ对心肌细胞的损伤。
- 张明魏瑾单虎闫蕊林琳朱延河
- 关键词：雌激素心肌细胞P66SHC
- 低硒对大鼠心脏功能及心肌线粒体超微结构的影响被引量：4
- 2013年
- 目的动态观察低硒对大鼠在体心功能及线粒体超微结构的影响，探讨低硒致心肌损伤的机制。方法断乳2周清洁级SD大鼠48只，按体质量随机分为低硒（LS）组和对照（NC）组，每组24只，雌雄各半。对照组给予常规饲料（硒含量0．10～0．30mg／kg）喂养，低硒组给予人工合成低硒饲料（硒含量0．01mg／kg）喂养。两组大鼠分别在喂养10、20、30、40周后，各选取6只，雌雄各半，2，3-二氨基奈荧光法检测血硒水平；颈动脉插管检测大鼠在体心功能：电子天平称心脏重量；透射电镜下观察心肌线粒体的超微结构并用体视学方法对线粒体结构的变化情况进行定量分析。结果与NC组比较[（0．421±0．076）、（0．409±0．057）、（0．416±0．033）、（0．386±0．050）mg／L]，I_5组大鼠喂养10、20、30、40周后血硒降低[（0．102±0．018）、（O．053±0．012）、（0．045±0．014）、（0．027±0．008）mg／L，P均〈0．05]。大鼠喂养到20、30、40周时，Ls组左心室峰值收缩压（LVSP）[（113．30±2．21）、（103．82±5．24）、（97．74±2．87）mmHg，1mmHg=0．133kPa]和左心室内压最大上升速率（＋dp／dtmax）『（7366．10±455．61）、（6160．68±402．17）、（5381．21±646．72）mmHg·s0]均明显低于相应NC组『（130．30±3．72）、（118．97±5．31）、（120．08±3．29）mmHg，（10430．00±808．56）、（8582．62±621．14）、（8295．88±1318．29）mmHg·S-1，P均〈0．05]，且LVSP和＋dp／dtmax均随低硒喂养时间延长而逐渐减低（P均〈0．05）。大鼠喂养到20、30、40周时，LS组心脏与体质量之比（Hw／BWX100，0．2859±0．0081、0．2948±0．0171、O．2949±0．0056）、左心室与体质量之比（LVW／BW×100，0．2302±0．0041、0．2387±0．0131、0．2386±0．0024）、左心室与心脏重量之比（LVW／HW，0．8063±0．0122、0．8104±0．0031、0．8098±0．0109）均高�
- 潘晓青魏瑾王蕊朱延河张明林琳单虎闫蕊贺乐
- 关键词：硒心肌线粒体体视学
