广东省科技计划工业攻关项目(2006B20130004)
- 作品数：7 被引量：64H指数：5
- 相关作者：潘丽晶范干群张妙彬曹友培肖杨更多>>
- 相关机构：珠海市农业科学研究中心中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 双重RT-PCR同时检测兰花两种主要病毒的研究被引量：2
- 2010年
- 以利用Trizol试剂盒提取的蝴蝶兰组培苗叶片总RNA为模板,根据已报道的建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglussm ringspot virus,ORSV)外壳蛋白基因(cp)的保守序列设计特异性引物,探索RT-PCR反应条件,建立了可同时检测CyMV和ORSV的双重RT-PCR体系。
- 张妙彬潘丽晶肖杨杨玉环
- 关键词：兰花双重RT-PCR建兰花叶病毒齿兰环斑病毒
- 从富含多糖的石斛兰花蕾中提取总RNA初探被引量：1
- 2009年
- 石斛兰花蕾中含有大量多糖,干扰RNA的提取与纯化。研究表明,采用含高盐的1.5%SDS裂解液,配合LiCl沉淀RNA,去除多糖类物质,获得了完整性好、质量高的RNA,完全适用于后续的分子生物学研究。
- 岑鹏潘丽晶张妙彬范干群程萍
- 关键词：多糖RNA提取
- 石斛兰dfr基因植物表达载体的构建被引量：7
- 2009年
- 石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAM BIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。
- 潘丽晶范干群张妙彬肖杨曹友培
- 关键词：石斛兰正义反义植物表达载体
- 农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究被引量：18
- 2008年
- 利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎（PLBs），研究了石斛兰对潮霉素的敏感性，并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮（AS）等对石斛兰转化的影响。结果表明：带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105（简称为E1301）比带有相同表达载体的LBA4404（简称L1301）对石斛兰的转化效率更高，前者约为后者的6倍；较高浓度的侵染液转化效率更高（OD600为1．0或1．2时的转化效率约为OD600为0．6或0．8时的2倍）；在农杆菌生长至OD600值为0．8时，添加AS可提高转化效率；而当OD600为0．6、1．0和1．2时，添加AS反而不同程度地降低转化效率；在各种处理中，OD600为1．0时不添加AS的转化效率最高，达44．4％。经过5—6个月选择培养，抗性小苗经GUS染色、PCR和Southern杂交检测证明为转基因植株。
- 张妙彬梁擎中肖浩岑鹏范干群潘丽晶
- 关键词：石斛兰GUS根癌农杆菌SOUTHERN杂交
- 石斛兰dfr基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：15
- 2010年
- 二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)在不同花色形成中起着关键作用。利用RT-PCR方法从石斛兰中克隆出dfr基因,并命名为Dendfr。该序列全长1164bp,编码352个氨基酸。氨基酸序列分析发现,DenDFR与3种兰科植物的DFR氨基酸序列同源性达81%～86%,与其他非兰科植物的DFR氨基酸同源性在56%～72%之间。在DenDFRN-末端存在一个保守的NADP结合区,序列中存在26个氨基酸组成的底物特异结合区,其中134位氨基酸处存在特异的天冬酰胺N位点。将Dendfr的编码区克隆到pQE30载体中,在大肠杆菌中高效表达了该蛋白,为进一步研究石斛兰花色形成机制及花色改良基因工程打下基础。
- 潘丽晶张妙彬范干群陈伟庭曹友培
- 关键词：石斛兰花色克隆原核表达
- 苏云金芽孢杆菌aiiA基因载体构建及石斛兰转化被引量：7
- 2009年
- 细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出可用于转入石斛兰的pSAN载体;首次利用根癌农杆菌EHA105将pSAN载体转入石斛兰,并获得潮霉素抗性苗。这些抗性苗经GUS组织化学染色和PCR检测证实为转基因苗,这将为获得具有软腐病抗性的石斛兰品种打下基础。
- 潘丽晶张妙彬梁擎中范干群程萍
- 关键词：软腐病AIIA基因根癌农杆菌
- 观赏石斛育种技术研究综述被引量：17
- 2009年
- 介绍了观赏石斛育种的目的和意义,综述了近10年来石斛兰育种的主要途径,包括种质资源保护、传统育种、杂交育种、分子标记辅助育种和基因工程育种等。结合石斛兰育种的现状及存在问题,提出了一些解决措施,以期为今后的育种工作提供借鉴。
- 潘丽晶曹友培肖杨范干群陈伟庭
- 关键词：育种
