国家高技术研究发展计划(2007AA091503)
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
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- 相关领域：生物学化学工程理学轻工技术与工程更多>>
- 基于抗肿瘤活性化合物MED烟酸类衍生物的设计及作用靶点被引量：1
- 2010年
- 通过变性荧光素酶的再复性实验发现真菌环氧二烯(Mycoepoxydiene,MED)对热休克蛋白(Heat shock protein 90,Hsp90)具有抑制作用.Western Blot实验结果表明,MED影响人宫颈癌细胞株HeLa中Hsp70及Hsp90的客户蛋白质(Akt,Raf-1)的表达,表明MED是Hsp90的抑制剂.通过靶向对接技术预测了MED与人Hsp90 N端ATP结合位点的结合情况,并在此基础上发现,MED的烟酸类衍生物4-NDM与Hsp90的结合具有比MED与Hsp90更强的亲和作用.体外实验结果证明,MED的烟酸类衍生物4-NDM及3-NDM对HeLa细胞表现出比MED更强的细胞毒活性;可通过上调Hsp70,并下调Akt和Raf-1而影响HeLa细胞中Hsp90相关蛋白质的表达.由此推测,MED及其烟酸类衍生物可以通过抑制Hsp90,而使其客户蛋白Akt或Raf-1发生降解,发挥其抗肿瘤作用.
- 张连茹易玉婷陈俊杰张伟黄耀坚郑忠辉宋思扬沈月毛
- 关键词：AKT
- 去乙酰真菌环氧乙酯发酵放大及其溶氧参数的控制
- 2010年
- 报道了拟茎点霉P2-139（Phomopsis sp.P2-139）在前期培养基质优化的基础上,进行的10,50和200 L发酵罐中培养条件和中试放大的研究结果.在10 L发酵罐中,P2-139菌株的最佳发酵培养基为：马铃薯240 g/L,葡萄糖75 g/L,陈海水20%（体积分数）,pH自然.机械剪切力对去乙酰真菌环氧乙酯的产生和产量影响不大.临界氧浓度和KLa测定结果表明,P2-139菌株生长的溶氧浓度（DO）值应维持在20%~30%以上才能保证菌株的正常生长和代谢;200 L罐中试放大DO值的控制为：发酵初期（0~96 h）20%以上,发酵中期（96~216 h）28%以上,发酵后期30%~60%;发酵基质为：马铃薯180 g/L,葡萄糖60 g/L,陈海水20%（体积分数）,pH自然;发酵后期流加葡萄糖使残糖质量浓度控制在10 g/L左右.在此条件下,去乙酰真菌环氧乙酯的产量可达120 mg/L以上.
- 林鹏周显凤黄耀坚宋思扬郑忠辉沈月毛
- 关键词：去乙酰真菌环氧乙酯溶氧浓度剪切力中试
- 诱导子对拟茎点霉139产去乙酰真菌环氧乙酯的调节作用被引量：3
- 2011年
- 去乙酰真菌环氧乙酯(DAM)是红树植物秋茄内生真菌拟茎点霉A123菌株产生的次级代谢产物,为了进一步提高DAM的产量,选择和制备了13种诱导子,对具有较强抗肿瘤活性的139菌株进行诱导,考察诱导子对菌株产DAM的调节作用.结果表明,白色假丝酵母菌(Candida albicans)细胞壁制备物和壳聚糖具有显著的正调节作用;采用CCD设计响应面实验获得最佳诱导条件为:发酵144 h后加入100 mg/L壳聚糖,通过高效液色谱仪测定DAM最高产量,其峰面积可达2 296.38,比同批空白对照提高36%.
- 袁丽峰黄耀坚郑忠辉沈月毛
- 关键词：诱导子去乙酰真菌环氧乙酯壳聚糖
- 反相柱层析制备去乙酰真菌环氧乙酯被引量：6
- 2009年
- 研究不同条件下反相柱层析对去乙酰真菌环氧乙酯分离纯化的影响.通过RP-18中压柱层析对从红树林内生真菌拟茎点霉(Phomopsissp.)A-1-2-3诱变后突变株G1-1固体发酵提取物中的去乙酰真菌环氧乙酯进行了纯化精制.对RP-18柱层析纯化去乙酰真菌环氧乙酯操作条件进行了考察,使去乙酰真菌环氧乙酯的含量从28%左右提高到81.5%左右,回收率大于90%.采用RP-18直接洗脱,溶析结晶,重结晶,结晶残液RP-18分步洗脱的总工艺路线,去乙酰真菌环氧乙酯的总回收率为87.7%,产品最终纯度达到99%以上.
- 周显凤张伟黄耀坚郑忠辉沈月毛
- 关键词：拟茎点霉去乙酰真菌环氧乙酯柱层析分离纯化
- 去乙酰真菌环氧乙酯发酵液预处理工艺
- 2009年
- 为了降低去乙酰真菌环氧乙酯发酵液粘度,改进过滤效果,考察了β-葡聚糖酶对去乙酰真菌环氧乙酯发酵液粘度的影响,并进一步研究了不同类型的絮凝剂对发酵液过滤速度、沉降率、有效过滤体积和去乙酰真菌环氧乙酯含量的影响.通过正交试验,确定了非离子型聚丙烯酰胺的最佳絮凝工艺条件,应用统计学手段获得了最佳酶促反应时间和酶用量.结果表明,β-葡聚糖酶和非离子型聚丙烯酰胺的联合使用,可使滤速提高80%,有效过滤体积增加50%,保证了去乙酰真菌环氧乙酯的发酵量.
- 袁丽峰周显凤黄耀坚郑忠辉沈月毛
- 关键词：去乙酰真菌环氧乙酯絮凝剂Β-葡聚糖酶
- 去乙酰真菌环氧乙酯琼脂表面培养基质的优化被引量：1
- 2009年
- 去乙酰真菌环氧乙酯是一种骨架为含氧桥的环二烯类化合物,具有较高的抗肿瘤活性.以其产生菌拟茎点霉414菌株(Phomopsissp.414)出发,利用响应面法对琼脂表面培养的发酵基质进行优化.采用单因素法和Plackett-Burman设计,从17种因素中筛选出提高产量的主要因素,继而利用响应面法确定各因素的最优水平.当葡萄糖为25.56 g/L、甘露醇为12 g/L、马铃薯为231.82 g/L时,拟茎点霉414菌株发酵产去乙酰真菌环氧乙酯可达108.9 mg/L,为优化前的3.2倍.
- 徐莹张连茹黄耀坚郑忠辉沈月毛
- 关键词：去乙酰真菌环氧乙酯响应面法
- 响应面法优化南强菌素发酵培养基被引量：5
- 2009年
- 从海洋真菌Phomopsis sp.A123分离得到的南强菌素(Deacetylmycoepoxydiene)是2003年新发现的具有抗肿瘤活性化合物.采用单因素筛选方法,筛选得到影响该化合物产生的4个因素,分别为葡萄糖、维生素B1、马铃薯和甘露醇.在此基础上,采用响应面法对4个因素最佳水平范围进行研究,利用Design-Expert软件进行2次回归分析,在培养基中葡萄糖、维生素B1、马铃薯和甘露醇的含量分别为87,0.005,170和14 g/L时,南强菌素的产量从35 mg/L提高到200 mg/L.
- 张伟黄耀坚郑忠辉宋思扬沈月毛
- 关键词：海洋真菌抗肿瘤化合物响应面法
- 基于Hsp90 ATPase活性的抑制剂筛选模型研究被引量：4
- 2010年
- 热休克蛋白90(Heat shock protein,Hsp90)作为分子伴侣,参与调控肿瘤细胞多条信号通路,对肿瘤细胞生长有重要作用.以pGEX-4T-1为载体,构建了Hsp90表达载体于宿主大肠杆菌中表达.通过孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,测定异源表达的Hsp90 ATPase活性.实验得出Hsp90对ATP的米氏常数(Km)为369.1μmol/L,在Hsp90和ATP浓度分别为0.18,1 mmol/L时转换效率常数(kcat)为1.6 min-1,最大反应速率(Vmax)为1.0μmol/(L.min).基于该方法,建立Hsp90 ATPase活性抑制剂筛选模型,以Geldanamycin和Radicicol为阳性对照,发现Rifamycin、Rugulosin及My-coE也有较强的Hsp90 ATPase抑制活性.该方法可用于筛选抗肿瘤候选化合物的研究,同时也可为具有ATPase活性蛋白的抑制剂筛选提供参考.
- 陈俊杰郭秋菊贺晓萌杨世新陈澄张连茹
- 关键词：PGEX-4T-1HSP90ATPASE活性
- Identification and Characterization of an Agonist for the AMP-activated Protein Kinase
- ＜正＞AMP-activated protein kinase（AMPK）,composed of three subunitsα,βandγ,belongs to the family of serine/threon...
- 沈月毛李蓬
- 文献传递
- 去乙酰真菌环氧乙酯的质量标准和稳定性研究
- 2010年
- 采用高效液相色谱、红外光谱和热失重等技术,结合影响因素实验、加速实验和长期实验等方法,对抗肿瘤候选药物——去乙酰真菌环氧乙酯(DAM)的性状、鉴别、含量测定以及对光、热等稳定性进行研究.建立了DAM的鉴别和含量测定方法等相应的质量标准;稳定性实验结果表明:DAM对光、热均具有较好的稳定性,提示其可以在密闭常温条件下贮存,为DAM的后续开发奠定了基础.
- 徐莹黄耀坚张连茹黄欢郑忠辉沈月毛
- 关键词：去乙酰真菌环氧乙酯稳定性
