四川省科技攻关计划(05NG002-002-2)
- 作品数：3 被引量：27H指数：2
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- 甘薯S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因克隆与表达被引量：12
- 2007年
- 从实验室建立的甘薯冷胁迫抑制消减文库中分离出一cDNA片段,经NCBI比对后发现该片段与其它植物的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因具有90%的同源性,根据相关物种S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因cDNA序列设计引物,以甘薯总RNA为模板,经RT-PCR扩增首次获得全长1182bp的甘薯SAMS完全编码区,NCBI比对分析结果表明:该片段与不同种属植物sams基因的编码区序列的核苷酸相似性达85.48%,所推导的氨基酸序列相似性达93.6%。根据核苷酸序列和氨基酸序列分别构建了SAMS系统进化树,从分子水平阐明了植物种属间的亲缘进化关系,为其种质资源利用提供理论依据。利用该序列与原核表达载体pET32a连接构建融合表达载体pET-SAMS,酶切鉴定后转入大肠杆菌BL21,在不同温度下诱导3h后均表达出一63KDa大小融合蛋白。
- 岳昌武何博文何明雄张义正
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸合成酶冷胁迫RT-PCR原核表达
- 甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因在胁迫条件下的表达分析被引量：14
- 2009年
- 成功地构建了甘薯谷胱甘肽-S-转移酶基因IBGSTU1的原核表达质粒pET-IbGST,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。酶活性测定表明可溶的重组蛋白具有GST的活性。纯化的重组蛋白质用于多克隆抗体的制备。半定量RT-PCR和Western blotting分析结果显示,在正常的生长条件下,甘薯组织不启动IBGSTU1基因的转录和翻译,但是在冷胁迫或重金属离子等的作用下,可以检测到该基因的mRNA和编码的蛋白质,表明该基因在甘薯的胁迫耐受中行使重要功能,并发现该基因的表达具有组织特异性。
- 刘珣何博文张义正
- 关键词：甘薯谷胱甘肽-S-转移酶冷胁迫RT-PCR蛋白质印迹
- 甘薯愈伤组织分化及抗生素耐受性研究被引量：2
- 2009年
- 为研究不同甘薯品种愈伤组织对抗生素的耐受性,以及在不同激素配合使用时的分化情况,为甘薯转基因工程奠定基础,将不同浓度的羧苄青霉素、卡那霉素和潮霉素以及不同浓度和组合的NAA、BAP和2,4-D添加到MS培养基,接种不同来源的甘薯愈伤组织并进行观察。不同甘薯品种对3种抗生素耐受性表现出一定差异,在较低羧苄青霉素浓度(100mg/L)的MS固体培养基中,所有品种愈伤组织生长良好。在较高羧苄青霉素浓度(≥500mg/L)的MS固体培养基中,南薯99和绵粉7号表现出较强的抗生素耐受性。NAA(0.1mg/L)与较高浓度BAP(≥1.0mg/L)配合使用,不同品种愈伤组织分化率为100%,较低浓度BAP(0.1mg/L)与不同浓度NAA配合使用,分化率极低。
- 何博文岳昌武张义正
- 关键词：甘薯愈伤组织分化
